DB22∕T 3090-2019 绵羊幼畜超排技术规程.pdf

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1、ICS65.020B05DB22吉林省地方标准本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T3090—2019绵羊幼畜超排技术规程Juvenileinvitroembryotransfertechnologystandardsregulationsonsheep本标准仅供内部使用不得翻印2019-12-25发布2020-02-01实施吉林省市场监督管理厅发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T3090—2019本标准仅供内部使用不得翻印前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则

2、起草。本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。本标准起草单位：吉林省农业科学院。本标准主要起草人：王春昕、张明新、侯健、赵云辉、赵卓、翟博、苑志宇、张莹、郭洋、闫凤祥、关宏、马骏、柴浩晨、吴翠玲、宗兴龙、刘克雄、田浩、张玉梅、齐琪、段增祎。本标准仅供内部使用不得翻印I本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T3090—2019本标准仅供内部使用不得翻印绵羊幼畜超排技术规程1范围本标准规定了绵羊幼畜超排的技术流程图、卵母细胞采集、体外受精、胚胎鉴定和胚胎移植。本标准适用于绵羊幼畜超排技

3、术操作。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T826绵羊胚胎移植技术规程NY/T1571羊胚胎移植技术规程NY/T1674牛羊胚胎质量检测技术规程NY/T1900畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范3术语和定义本标准仅供内部使用不得翻印下列术语和定义适用于本文件。3.1幼畜超排juvenileinvitroembryotransfer从幼畜获取卵母细胞进行胚胎体外生产

4、和移植的一套完整的综合技术体系，包括性成熟前动物激素处理诱导卵母细胞发育、活体采卵、卵母细胞体外成熟、体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植等技术的过程。3.2超数排卵superovulation在母羊发情周期的适当时间，施以外源促性腺激素，促使母畜比自然状态有更多卵泡发育并排卵。3.3同期发情estrussynchronization通过外源激素处理等人为手段调整母羊的发情周期，使其在预定时间内集中发情的技术。3.4供体donor提供用于胚胎生产的卵母细胞的4-8周龄母羔羊。3.5受体receptor接受胚

5、胎移植的成年母羊。3.6卵母细胞采集oocytescollection使用冲卵液将发育到一定时期的卵母细胞从卵巢中采集回收的过程。1DB22/T3090—20193.7胚胎移植embryotransfer将胚胎植入到同期发情的母羊输卵管或子宫内的过程。本标准仅供内部使用不得翻印3.8精子体外获能sperminvitrocapacitation精子在体外经获能因子诱导，增加精子受精能力，改变膜的通透性，降低顶体膜稳定性，使精子辨识卵子，穿入卵子受精的过程。4技术流程图绵羊幼畜超排技术流程如图1所示。获得的

6、卵母细胞和胚胎在体外进行操作时，应置于37℃恒温台上，所用液体试剂应预热至38.5℃再进行使用。本标准仅供内部使用不得翻印图1绵羊幼畜超排技术流程图5卵母细胞采集2DB22/T3090—20195.1供体、受体选择5.1.1选择健康、繁育性能良好的成年母羊作为受体，将放置阴道栓当天记为第0天，第13天撤栓并注射PMSG400IU/只，进行同期发情处理。本标准仅供内部使用不得翻印5.1.2选择4周龄～8周龄，体重在5kg～15kg，有完整系谱档案的健康母羔作为供体。与母羊同圈饲养，适量补饲羔羊料。5.2超

7、数排卵超数排卵操作应符合表1规定。绵羊幼畜超排技术实施计划见表1。表1绵羊幼畜超排技术实施计划表周期0日11日12日13日14日15日16日20～22日注射1次PMSG注射FSH注射FSH330IU/只30IU/只。30IU/只。供卵羊注射FSH手术采卵每天2次，每天2次，30IU/只。间隔12h间隔12h每天2次，间隔12h本标准仅供内部使用不得翻印放置撤栓，注射受体羊阴道PMSG试请试情胚胎移植胚胎移植栓400IU/只卵母细胞卵母细胞2～4桑葚胚、卵母细胞、胚胎体外成熟体外受精细胞期囊胚5.3采集方

8、法第14天，手术法暴露供体卵巢，用含有2mL吸卵缓冲液的20G针头一次性注射器刺吸法采集卵巢卵泡中的卵母细胞。吸卵缓冲液配方应符合附录A.1的规定。5.4挑选卵母细胞将吸取卵母细胞后的吸卵缓冲液放入培养皿中，在体视显微镜下挑选出形态完整、胞质均匀、有多层卵丘细胞紧密包围的卵丘—卵母细胞复合体。5.5卵母细胞体外成熟5.5.1将挑选出的卵丘—卵母细胞复合体先用吸卵缓冲液中清洗3次，再在成熟培养液清洗2次。5.5.2转入预先在CO2培养箱中平衡