细菌简单染色法.doc

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1、生物实验简单染色峰峰高中生物组适用微生物染色原理简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷(酸性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷)，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着。染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。其它情况分析：常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。使用草酸铵结

2、晶紫染色液，染色迅速，着色深，菌体呈紫色。一

3、、步骤1、涂片1.取一块干净的载玻片，平放，在载玻片中央滴一小滴生理盐水；2.用接种环无菌操作从琼脂斜面上挑取适量菌苔；3.将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混匀并涂成薄膜。注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚。2、干燥将涂好菌膜的载玻片平放在室温下自然干燥。也可用电吹风低温吹干。3、固定手持(木夹夹住)已干燥的涂有菌膜的载玻片，涂面朝上，在酒精灯火焰上通过2~3次。原理：加热使细菌细胞的蛋白质凝固，从而固定细菌细胞

4、形态，并使之牢固附着在载玻片上。注意：热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破坏细胞形态。4、染色将热固定的细菌涂片平放于在载玻片架上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。染色时间：吕氏碱性美蓝染色1~2min；石炭酸复红染色约1min；草酸铵结晶紫染色约1min。5、水洗将细菌涂片上染液倒入废液缸中；手持细菌染色涂片，置于废液缸上方，用洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的水无色为止。注意：水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下。水流不宜过急，过大，以免涂片薄膜脱落。6、干燥自然干燥：平

5、放于室温，自然干燥；吹干：用电吹风冷风或低温热风吹干；吸干：平放在一张吸水纸上，上面覆盖一张吸水纸，将细菌涂片两面水分吸干。二、配方1、吕氏碱性美蓝染液溶液A美蓝0.6克；95%乙醇30毫升溶液B氢氧化钾0.01克；蒸馏水100毫升分别配制溶液A和B配好后混合即可。2、石碳酸复红液：称取碱性复红10g，研细，加95％乙醇100ml，放置过夜，滤纸过滤。取该液10ml，加5％石碳酸水溶液90ml混合，即为石碳酸复红液。再取此液10ml加水90ml即为稀石碳酸复红液。3、草酸铵结晶紫染液A液：结晶紫(cry

6、stalviolet)1g，95%酒精20mlB液：草酸铵(ammoniumoxalate)0.8g，蒸馏水80ml混合A、B二液，静置48小时后使用。