几种显微镜的区别.doc

《几种显微镜的区别.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、荧光显微镜小广告O(∩_∩)O~川大细胞4252972501.荧光技术（1）荧光原理   荧光分子吸收入射光能量后，电子由基态跃迁到激发态。激发态电子不稳定，会自发跃迁回基态，并辐射荧光。辐射荧光λ＜入射光λ。（2）荧光探针   ①荧光素    如：罗丹明B   ②荧光蛋白  如：绿色荧光蛋白（GFP）（3）荧光分类  ①自发荧光：如叶绿素、血红素等荧光分子经紫外线照射后，能够自发辐射红色荧光。  ②诱发荧光：物质经荧光染料染色后，再经紫外线照射，进而辐射荧光。2.荧光显微镜（1）荧光显微镜概述  荧光显微镜是指利用短波长电磁波为光源，激发

2、样品辐射荧光，之后利用样品产生的自发荧光或诱发荧光，对细胞内特异性蛋白质进行定性与定位研究的装置。（2）荧光显微镜的特殊构件①石英透镜②滤光片系统   激发滤片，位于光源与样品之间，滤过可见光，只允许作为光源的紫外光通过。     阻断滤片，位于物镜与目镜之间，只允许荧光分子产生的荧光通过。（3）荧光显微镜的特点①优点：荧光显微镜主要用于定性、定位研究细胞内特异性蛋白质。可以观察活细胞。②缺点：无法排除来自样品焦平面以外的荧光，使得图像的反差与分辨率降低。3.激光扫描共焦显微镜（1）激光扫描共聚焦显微镜概述激光扫描共焦显微镜是指以激光为光源

3、，对样品进行逐点、逐行、逐面扫描成像的装置。其物镜与聚光镜共焦点，以提高分辨率。通过调节焦平面即可获得样品不同层次的图像，通过计算机分析和模拟，可以构筑样品的三维图像。（2）激光扫描共焦显微镜的成像原理   ①光源为激光，经双色镜反射后，通过物镜汇聚于样品某一焦点，激发荧光。样品所激发的荧光经透镜汇聚成像，通过共焦小孔被检测器检出。   ②物镜与聚光镜共焦点，使得只有从样品焦平面发出的荧光聚焦成像，其他部分的激发荧光不能通过共焦小孔，检测器不能检出。（3）激光扫描共焦显微镜的特点  ①分辨率比普通荧光显微镜提高1.5倍。  ②通过改变焦平面

4、，可以获得样品不同层次的图像，从而可以构筑样品的三维图像。  ③可以实现长时间活细胞动态观察。电子显微镜无耻小广告：川大细胞425297250 O(∩_∩)O~一、透射电子显微镜1.透射电子显微镜概述   透射电子显微镜（TEM）是指利用电子枪发出的高能电子束照射超薄样品，透射电子经电磁透镜多次放大后成像的装置。其原理为样品不同部分对电子束的散射程度不同。主要用于观察样品精细结构。   透射电子显微镜的分辨本领是指电镜处于最佳状态时的分辨率。2.透射电子显微镜的基本构造（1）照明系统：电子枪、聚光镜（2）成像系统：电磁透镜（物镜、中间镜、投

5、影镜等）（3）真空系统（4）记录系统：荧光屏or感光底片3.透射电子显微镜的样品制备（1）超薄切片技术：固定→包埋→切片→染色①固定：使样品的形态、结构与性质尽可能不发生变化。 固定剂的种类：锇酸、戊二醛、高锰酸钾②包埋：使样品的精细结构在切片中得到支撑，获得的超薄切片连续完整并有足够的强度，耐电子轰击、耐高温、耐真空蒸发。包埋前常需脱水处理。 包埋剂的要求：A.高倍放大时不显示本身结构；               B.聚合时不发生明显收缩；        C.具有良好的机械性能。 包埋剂的种类：环氧树脂③切片：切片厚度的调控通常通过金属

6、热膨胀或机械伸缩。④染色：通常通过重金属盐对样品染色以形成明暗差，得到黑白图像。   常用重金属盐A.锇酸-脂质                B.铅盐-蛋白质                C.醋酸铀-核酸（2）负染色技术  负染色技术是指对背景染色的技术。通过用重金属盐对铺展在载网上的样品染色，使电子密度高的重金属盐布满整个载网，而凸出载网表面的样品则没有染料沉积，从而使背景散射电子能力增强，而样品散射电子能力减弱，以此衬托出样品的精细结构。负染色技术适合于观察生物大分子组成的结构，如：病毒、核糖体等。（3）冰冻刻蚀技术  冰冻刻蚀技术

7、主要用于观察膜断面表面形貌与膜断面蛋白质，样品无需包埋、固定，能够更好的反应样品的真实结构。①冰冻断裂：在液氮中将样品迅速冷冻，之后在低温、真空环境下用冰刀将其切断。由于断面的冰在真空中少量升华，可以增强刻蚀效果。②刻蚀复型：用金属铂进行倾斜喷涂，以形成电子反差，再用碳垂直于断面进行真空喷涂，形成连续碳膜，以复制样品的表面形貌。再用消化液消除样品本身，之后将之移到载网上用电镜观察。二、扫描电子显微镜1.扫描电子显微镜概述   扫描电子显微镜（SEM）是指利用高能电子束扫描样品，激发样品表面产生二次电子，进而依据样品不同部位产生二次电子数量的

8、多少而成像的装置。主要用于观察样品表面形貌。2.扫描电子显微镜的样品制备（1）喷镀技术   在样品表面喷涂一层金膜，以增强其导电性。（2）CO2临界点干燥法   将样品浸入液态C