水套式二氧化碳细胞培养箱使用标准操作流程。.doc

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1、文件等级：内部公开文件文件编号：AJ-XZ-150701ThermoForma3111/3131水套式细胞培养箱使用标准操作流程1.目的规范使用本公司水套式CO2细胞培养箱ThermoForma3111及水套式CO2、N2细胞培养箱ThermoForma3131（除特殊注明外，以下简称细胞培养箱）操作流程，确保本公司细胞技术员正确使用细胞培养箱。2.范围和职责仪器使用操作人员应遵循本程序操作及使用规范，适用于使用本公司细胞培养箱的所有工作人员。3.仪器设备及试剂ThermoForma3111水套式CO2细胞培养箱ThermoForma3131水套式CO2、N2细胞

2、培养箱CO2减压阀（上海减压器厂、YQT-731）N2减压阀（上海减压器厂、YQD-3）75%酒精84消毒液CO2及N2温度计文件等级：内部公开文件文件编号：AJ-XZ-1507011.CO2培养箱安装及调试4.1根据量程购买合适的CO2及N2减压阀，细胞培养箱位置摆放：应遵循方便使用原理，不得靠近细胞室出入口摆放，应摆放于本公司细胞室相对于更加洁净的区域，且必须注意CO2及N2钢瓶位置、培养箱开门方向和倒置显微镜位置，方便查看细胞状态及换气；4.2CO2/氮钢瓶摆放：应遵循钢瓶容易更换，导气管长度合适原理；4.3水套式细胞培养箱在使用前必须对箱体进行超纯水加注，

3、将随机提供的橡胶管连接超纯水仪和细胞培养箱体左上侧加水口，打开超纯水仪阀门，缓慢给水箱加水，最好能先进行超纯水灭菌处理，以超纯水刚好从最高水位线水溢出为止；4.4细胞室进行第一遍消毒或熏蒸后，紫外照射30分钟以上；4.5培养箱灭菌：本公司细胞培养箱不能进行自动除菌，必须进行手动除菌，箱体内隔板可以进行拆除单独清洗及高温高压灭菌，不能拆除的部件先用75%酒精擦拭一遍，自然晾干，然后用0.15%84消毒液再次擦拭，自然晾干，最后用75%酒精再擦拭最后一遍，敞开培养箱过夜，细胞室进行第二次灭菌操作；4.6第二天灭菌进入细胞室后，关上舱门，用导气管一端接入细胞培养箱进气口

4、，一端连接CO2/N2减压阀，再通过减压阀上面的螺纹用扳手将减压阀连接到钢瓶上，旋紧至不漏气为止；4.7培养箱校准（以ThermoForma3111CO2培养箱为例）：打开细胞培养箱电源，放入一支经过消毒处理后的温度计，启动自检程序，待程序稳定后，进入以下设置；文件等级：内部公开文件文件编号：AJ-XZ-1507014.7.1按 Mode 键使光标移至 Cal模式,，此时显示屏显示“CalCALIBRATE”， 按← → 键使显示屏显示“TEMPCAL XX.X”, 按动↑和↓键调整数字（即温度计读数），并按动Enter键加以保存，按动 Mode 键使光标移至 R

5、un 模式退出设置。注意：一般情况下，细胞培养箱的起始温度不需要校准，若起始温度与温度计显示温度不符时才需要进行起始温度校准。4.7.2按 Mode 键使光标移至 Set 模式, 此时显示屏显示“SETPOINTS”, 按← → 键使显示屏显示“TEMP  XX.X”, 再按 ↑和↓ 键直至显示“TEMP37.0℃”后按“ENTER”键确认，按动 Mode 键使光标移至 Run 模式退出设置。 此时 Heat灯（即加热灯）会亮,  箱内温度会慢慢升高至37℃。注意：若环境温度低，升温至37℃是一个比较漫长的过程，且必须要等温度升至37℃才能设置起始CO2浓度。4.

6、7.3按 Mode 键使光标移至 Cal模式，此时显示屏显示“CalCALIBRATE”，按动←和→键使显示屏显示“CO2CAL   XX.X”，按动↑和↓键直至CO2CAL0%，并按动Enter键加以保存，按动 Mode 键使光标移至 Run 模式退出设置。4.7.4 按 Mode 键使光标移至Set模式，  此时显示屏显示“SET  POINTS”，按动←和→键使显示屏显示“TEMP   XX.X℃”，设置温度，按动↑和↓键可以选择所需的数字（一般细胞培养用温度为37℃），并按动Enter键加以保存。按动←和→键使显示屏显示“OTEMP  XX.X℃”，设置超

7、温报警温度，比设定高0.5℃-1℃即可，并按动Enter键加以保存。按动←和→键使显示屏显示“CO2 XX.X %”设定CO2浓度（细胞培养用CO2浓度一般为5%），并按动Enter键加以保存，按动 Mode 键使光标移至 Run 模式退出设置。文件等级：内部公开文件文件编号：AJ-XZ-1507014.7.5待温度达到设定值后。将CO2钢瓶开启，开启前应先关闭减压阀，防止减压阀输出压力过高导致输气橡皮管暴裂，减压阀上进气压力表指示钢瓶内CO2压力，然后缓慢地顺时针拧减压阀旋扭。使减压阀输出压力指示为0.05Mpa左右，指针处于刻度线中间。待温度和CO2浓度达到设

8、定值后，放