现代微生物鉴定技术.ppt

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1、现代微生物鉴定技术中国药品生物制品检定所抗生素室马越一API鉴定系统二自动微生物系统三分子生物学在细菌分类中的应用一API鉴定系统由于传统的细菌鉴定方法费时、耗力，因此出现多种类型的的成套鉴定系统及编码鉴定系统方法，使细菌鉴定简易化、微量化和快速化。API鉴定系统是在世界范围内应用最广、种类最多的系统。分类1）快速鉴定系统如:RapideoZ沙门菌、志贺菌等2小时生化反应项目52）特定菌属（群）的鉴定系统如：APIStaph，APIStrep可鉴定28个和35个种，生化反应项目203）ATB（

2、AutomaticTestingBacteriology）系统API方法电脑化，可自动读取鉴定结果，使用时需将鉴定板与自动化仪器结合起来。4）用于研究细菌对糖的发酵、氧化和同化能力以及细菌所具有的酶谱（Enzymesprofile）数值鉴定的基本原理数值鉴定是通过出现频率的计算进行的，即每个分类单位的总出现频率与每个菌群中所有菌的总出现频率总和相比较而得。数值鉴定的应用生化图谱数码的编码法将生化反应所得阳性和阴性结果，转换成数码，再与索引中数码相比较完成鉴定。原则：所有的（20或32个）反应从阳性到阴

3、性的信息浓缩成一组数字。每3个反应为一组，组内按其位置第一位阳性为1，第二位阳性为2，第三位阳性为4，阴性为0。最终组成一个7位或10位数字。生化反应图谱索引手册的应用鉴定%≥99.9极好的鉴定%99.8-99.0很好的鉴定%98.9-90.0好的鉴定%98.9-80.0可以接受的鉴定%79.9以下低分辨率(不可信)API系统的操作接种物的制备试验条的接种读取结果二自动微生物系统（AutoMicrobicSystemAMS）美国BD公司BioMerieuxViteK气相色谱(GasChromatog

4、raphy)鉴定微生物红外光谱仪（InfraredSpectroscopy）鉴定微生物BioMerieuxViteKBioMerieuxViteK工作原理1革兰阴性、阳性菌的鉴定主要依据概率是最大拟燃模型法（Probabilisticmaximumlikelihoodmodel），通过计算机控制，读数仪每小时对孵育室中的测试卡自动扫描一次，进行光学检测，将所得数据送入计算机。因细菌的生长繁殖使测试小池的透光量减少，计算出百分变化值，以判定是否有细菌生长。计算机对测试菌各反应池结果的处理求出该菌的绝对拟

5、燃值（Absolutelikelihood）与内存模型菌比较进行鉴定。2厌氧菌的鉴定利用细菌生长产生的酶，用单一基质酶促反应原理，与测试卡中的少量基质反应，充入厌氧菌的鉴定卡，在非厌氧条件下培养小时，结果输入计算机，作出鉴定。3酵母菌鉴定酵母菌鉴定的测试卡与上述不同，菌液充入试验卡，先在30℃培养4小时，然后放入读数仪/培育室中读数，鉴定。如需要，计算机将提示再重复培养，测试一次。仪器的优点1功能多可以对革兰阳性，阴性，厌氧菌，酵母菌等作出鉴定2速度快获得纯培养后，充入试卡，一般细菌在18小时内，酵母

6、菌在2天内，作出鉴定。3结果准确可避免人主观判断的误差。其他不足1酵母菌的鉴定不能仅凭生化反应，要兼顾形态学特征。2在少数情况下，AMS系统不能作出鉴定，在排除操作错误以后，可能是该机现有资料库中没有相应的模式。气相色谱鉴定微生物原理根据细菌脂肪酸的构成谱（fattyacidcompositionprofiles）来鉴定细菌。提取未知微生物的脂肪酸，气相色谱仪自动定量测定脂肪酸一确定脂肪酸的构成谱，并与计算机数据库中的参考微生物进行比较，鉴定。该系统可鉴定到属、种、亚种及生化变异型。常用气相色谱鉴定微

7、生物系统有SherlockMicrobialIdentificationSystem（MIS）。MIS系统的标准库（MISStandardLibraries）该标准库包括有需氧菌、厌氧菌、酵母菌，很多领域内有特性的微生物均保存在标准库中。所以MIS系统的标准库可以应用于以下专业的微生物鉴定工作。医学及临床微生物环境微生物植物微生物工业微生物食品微生物兽医饮用水和废水MIS系统仅能鉴定那些标准库中包括或与其相关的菌种。另外，培养条件和样本制备必须根据要求进行。注意：脂肪酸谱与DNA同源性有关，而DNA

8、用于确定种的分类。所以，在有些科里，如肠杆菌科中有些菌种间关系密切，根据生化反应的分类学使该系统的鉴定会有二、三种选择的情况，此时，尚需用其他方法鉴定。另外，细胞在不同的环境条件中，为维持细胞膜的流动性其脂肪酸的成分有所改变。所以培养基的选择和培养温度一定要按规定进行。红外光谱仪鉴定微生物（InfraredSpectroscopy）原理细菌或其他微生物的红外光谱包含了化合物组分的资料信息，如细胞壁组分（酯类，多糖，多肽），核酸，蛋白质。菌种不同其红外光谱