实验一 培养基的制备.doc

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1、实验一培养基的制备一、目的与要求（一）学习制备培养基的基本技术。（二）制备牛肉膏蛋白琼脂培养基。二、原理牛肉膏蛋白培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌培养基，这种培养基屮含有一般细菌生长繁殖所需要的最基木的营养物质，可供作繁殖Z川，制作固体培养基时须加2%琼脂，培养细菌时，賊用稀酸或稀碱将PH调至屮性或微碱性。牛肉膏蛋白培养基的配方：牛肉膏0.5%,蛋白月东1%,NaC10.5%,pH7.4〜7.6。三、材料与仪器（一）试剂牛肉膏，蛋白月东、NaCl、琼脂、Imol/LNaOH、lmol/LHCL（二）其他试管，三角烧瓶，烧杯，量筒

2、，漏斗，乳胶管，弹簧夹，纱布，棉花，牛皮纸，线绳,pH试纸，电炉，台称。四、操作步骤（一）称量根据用量按比例依次称取成分，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表血1111屮称量,用热水溶化示倒入烧杯，蛋片月东易吸湿，称量时要迅速。（二）溶解在烧杯屮加入少于所需要的水量，加热，ZHU—加入各成分，使其溶解，琼脂在溶液点沸后加入,融化过程需不断搅拌。加热时应注意火力，勿使培养基烧焦或溢出。溶好后，补足所需水分。（三）调PH用lmol/LNaOH或lmol/LHCI把PH调至所需范伟

3、。（四）过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某些实验结果的

4、观察，如无特殊要求时可省去此步骤。（五）分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三解瓶内，分装装置如实验图8所示；分装时注意，勿使培养基沾染在容器口上，以免沾染棉塞引起污染。1.液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜，分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的1/2为宜。2.固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面，斜面长度不超过管长的l/2o分装三解瓶，以不超过容积的1/2为宜。1.半固体分装装置以试管高度的1/3为宜，火菌后垂直待凝。（六）加棉塞分装完毕后，在试管口或三解瓶口塞上棉塞（或泡

5、沫犁料塞及试管帽等，以阻止外界微生物进入培养基而造成污染，并保证有良好的通气性能。（七）包扎棉塞头上包一层牛皮纸，扎紧，即可进行火菌。（八）保存灭菌后的培养基放入37°C养箱屮培养24小时，以检验火菌的效果，无污染方可使用。五、实验报告（一）结果说明你配制培养基过程屮的情况。（二）思考题1.培养基配制时应注意什么问题？为什么？2.分装培养基时为什么要使用弹簧夹？3•培养基配好后，为什么要立即灭菌？实验二消毒与灭菌一、目的与要求了解干热火菌及高压熬汽火菌的操作方法。二、原理干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白凝固变性而达到灭菌的目的

6、，细胞内的蛋白质凝固性与其木身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白凝同越快，反之含水量越小凝固越慢。因此与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160〜170°C），时间长（l~2h）。高压蒸汽火菌是将待火菌的物品放入一个密闭的加压火菌锅内，通过加热，使火菌锅内水沸腾产生熬汽,水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀屮驱尽，然后关闭扌非气阀，继续加热，此时由于水蒸汽不能溢出而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点升高，得到高于100°C的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。一般培养基用O.IMPa、121.1°C.

7、15〜30min可达到彻底火菌，火菌的温度及维持的时间随火菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变.三、材料与仪器吸管、培养川L、试管、电热干燥箱，手提试高压蒸汽灭锅，牛肉膏蛋白月东培养基、蒸脩水。四、操作步骤（一）干热火菌法适用于空的、干燥的玻璃器皿的灭菌。培养基不适用。1・将包好的待灭菌物品（培养皿、试管、吸管等）放入电热干燥箱（注意留有一定的间隙），关好箱门。2.接通电源，打开排气孔，使箱内湿空气能逸岀，旋动恒温调节器，保持加热升温状态，至箱内达到100°C时关闭排气孔。3.当温度升到160〜170C时，借恒温调节器的自动控制，

8、保持此温度2h。4.切断电源，冷却至70°C时，打开箱门，取出灭菌物品（未降至70度以前，切勿打开箱门，占则温度骤降导致玻璃器皿炸裂）。（二）高压蒸汽灭菌1.首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角架相平为宜。2.放H内层锅，并装入待灭菌物品（内装培养基或小的三用瓶），不要装得太挤，以免妨碍汽流通影响火菌效果，三角瓶口不要与桶壁接触，以免冷凝水淋温包LI的纸而透入棉塞。加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内，再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个棉栓，使螺栓松紧一致，，勿使漏气。1.用电炉或其他方法加热，并同时打

9、开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气，待冷空气排尽后，关上排气阀让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升，当锅内达到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。2.停止加热，待压力表的压力降至零位时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖了，取出灭菌