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1、选择性培养基在矿泉水致病菌检测中的应用探析摘要：目的：探析选择性培养基在矿泉水中粪链球菌、铜绿假单胞菌及产气荚膜梭菌等儿人致病菌检测中的应用。方法：用滤膜法分别对致病菌进行选择性培养基及基础培养基培养，并对两组屮培养48h后致病菌的菌落数进行比较，综合计算致病菌的生长率；着重探讨总结选择性培养基的抑菌效果。结果：矿泉水致病菌分别经过十六烷三甲基漠化鞍琼脂培养皋A、十六烷三甲基澳化鞍琼脂培养基B、SPS、DrakeJsl9>TSC、KF六种培养基培养，致病菌的生长率90%的置信区间分别为(92.4%,116.
2、7%)、(19.7%,25.9%)、(89.7%,111.8%)、(84.7%,102.6%)、(76.8%,98.6%)、(82.4%,107.8%)；致病菌中的大肠埃希菌在各种选择性培养基中均受到良好的抑制。结论：十六烷二甲基漠化鞍琼脂培养基A、SPS、KF、TSC筹培养基具有较好的抑菌功用，可以将十六烷三甲基澳化钱琼脂系列培养基、S卩S、Drake'sl9、TSC、KF等儿项培养基作为矿泉水致病菌检测指标,为提高矿泉水安全检测水平提供指导。关键词：选择性培养基致病菌抑菌性矿泉水近年来，国家不断完善饮用
3、天然矿泉水检测标准，GB/T8538-2008已明确加检水中粪链球菌、铜绿假单细胞菌、产气荚膜梭菌、人肠菌群等指标。笔者着重就矿泉水致病菌检测项目及其检测中选择性培养基的应用进行分析探讨，具体报告如下。1、资料与方法1.1一般资料1.1.1实验菌株本次实验研究所用的菌株包括粪链球菌ATCC29212、铜绿假单胞菌ATCC15443、产气荚膜梭菌ATCC13124、大肠埃希菌ACTT25922四种标准菌株，所有菌株均由广东省微生物研究所微生物检测技术研发中心提供。1.1.2选择性培养基本次实验所用的选择性培养
4、基主要包括十六烷三甲基漠化鞍琼脂培养基A、十六烷三甲基漠化鞍琼脂培养基B、SPS（亚硫酸盐-多粘菌索-磺胺喘喘琼脂培养基）、TSC（无卵黄-胰蛋口月东-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂培养基）、KF（粪链球菌琼脂培养基）及国产自制的DrakeS19培养基六种培养基。其屮后四种培养基均由北京陆桥科技有限公司提供，十六烷三甲基漠化钱琼脂培养基系列由国外微生物科研公司提供。1.1.3其它设备及仪器本次实验用到的仪器还包括美国MILLIPORE的滤膜过滤器；另对照采用的基础性培养基有营养琼脂培养基、脑心浸萃琼脂培养基、品红亚
5、硫酸钠培养基三种培养基，均由北京陆桥科技有限公司提供；实验用的稀释液为0.85%的灭菌氯化钠溶液，蛋白豚水浓度规格为0.1%HPII值为7.0；此外,实验用的矿泉水取自各大超市。1・2方法1.2.1菌悬液的制备将大肠埃希氏菌、粪链球菌与铜绿假单细胞菌的标准菌株接种丁营养琼脂中，并将其置于35°C环境下进行时长为20-24H的复苏，选取接种复苏后的单菌落进一步接种于营养肉汤培养液中，36°C培养20-24小时，制成菌悬液备用；另将产气荚膜梭菌株接种于疱肉培养液中，36°C培养20-24小时，制成菌悬液备用。取
6、菌悬液并利用比浊器制成活菌悬液（菌液浓度为105-106cfu/ml）,然后依次进行10倍稀释，制成浓度规格不同的细菌悬液。1.2.2粪链球菌检验取三个适宜稀释度的粪链球菌悬液各1ml,并将具制成模拟水样250ml,将水样进行滤膜过滤，分别将滤膜放置于脑心浸萃琼脂培养基与KF琼脂培养基屮进行对照培养，置于温度为36°C±1°C的环境下培养48h,然后重复实验8次，进行菌落计数，并计算细菌在培养基中的生长率。1.2.3铜绿假单胞菌检验同样取三个适宜稀释度的细菌悬液各lml,制成模拟水样250ml,并进行滤膜过
7、滤，将滤膜分别置于十六烷三甲基漠化镀琼脂培养基A、琼脂培养基B、DrakeJsl9及营养琼脂对照培养基屮,置于温度为36°C±1°C的环境下培养48h,然后进行菌落计数，并计算细菌在培养基中的生长率，为保证计算的准确性，要重复实验8次。1.2.4产气荚膜梭菌检验取三个适宜稀释度的产气荚膜梭菌悬液各1眉，稀释成50ml的模拟水样，并进行无菌滤膜过滤，将滤膜分别置于SPS（亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺卩密睫琼脂）培养基及TSC培养基屮，并将其置于36°C±rC的厌氧环境中培养24小时，然后重复实验8次并计算菌落数量
8、与细菌生长率。1.2.5抑菌实验取三个适宜稀释度的大肠埃希菌悬液各lml,稀释成50ml的模拟水样，并进行无菌滤膜过滤，将滤膜置丁倒好的选择性培养基平板上，后再选取同样三个稀释度的大肠埃希菌悬液进行过滤，将滤膜置于品红亚硫酸钠琼脂培养基平板上，在与细菌检验环境同样的温度环境下进行时长为24-48h的培养，然后计算菌落数与细菌生长率。1.3计算与统计处理细菌检验及抑菌实验中计算细菌生长率的公式为:生长率二选择性培养
