超高效液相色谱法测定饲料中苯乙醇胺A.pdf

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1、第41卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第3期2013年3月ChineseJournalofAnalyticalChemistry389—393DOI：10．3724／SP．J．1096．2013．20773超高效液相色谱法测定饲料中苯乙醇胺A王瑞国苏晓鸥王培龙李阳樊宇飞(中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，农业部农产品质量安全研究重点实验室，北京100081)摘要建立了超高效液相色谱(UPLC)结合二极管阵列检测器(PDA)测定饲料中苯乙醇胺A的方法。根据样品基质的特点，采用相应提取液(配合饲料：0．

2、1％甲酸一甲醇，浓缩饲料：0．1％甲酸一甲醇(10：90，)；添加剂预混合饲料：0．1％甲酸一甲醇(20：80，V／V)进行振荡提取，混合阳离子固相萃取柱(PCX)净化。采用AcquityUPLCBEHShieldRP18色谱柱，以0．1％甲酸溶液一甲醇为流动相进行梯度洗脱，流速为0．4mL／min，检测波长为2781111。本方法线性范围为0．1～100mg／L；线性相关系数为0．999；定量限为1．0mg／kg。不同饲料样品基质中苯乙醇胺A的回收率为68．7％～96．8％；相对标准偏差(RSD)为2-4％～7．0％。

3、本方法简单快速，线性范围广，应用于实际样品检测，结果满意。关键词超高效液相色谱；二极管阵列检测器；饲料；苯乙醇胺A1引言苯乙醇胺A俗称克伦巴胺，化学名称为1．(4．甲氧基苯基)．2『1_甲基．3．(4-硝基苯基)．丙氨基1．乙醇，分子量为344．17，分子式为C。HNO_l】。苯乙醇胺A具有典型的苯乙醇胺结构(结构式见图1)，由于同一肾上腺素能受体激动剂结构类似，因而被认为是一种新型“瘦肉精”l3】。2010年12月，我国农业部将苯乙醇胺A列入禁止在饲料和动物饮用水中使用的物质名单。因此，建立饲料中苯乙醇胺A测定方法显得

4、非常必要。由于苯乙醇胺A是在我国首先发现的一种新型“瘦肉精”，目前国外尚无关于苯乙醇胺A检测方法的报道。国内也只有少数研究报道了应用液相色谱一串联质谱法检测饲料【5j和猪肉嘲中苯乙醇胺A，我国2010年底颁布的检测标准《饲料中苯乙醇胺A的测定》(农业部1486号公告一1-2010)也采用了高效液相色谱．串联质谱法。由于液相色谱一串联质谱仪价格昂贵，在一般的检测机构普及率不高。并且，“瘦肉精”类物质为达到促生长、提高瘦肉率的效果，其在饲料中的添加量一般较高，例如莱克多巴胺在生长肥育猪配合饲料中添加量一般高于5mg／kg【7

5、】，通常采用液相色谱法即可满足检测需求。由于大部分JB一肾上腺素能受体激动剂在紫外．可见光区域有特征吸收峰，可通过高效液相色谱法进行定量分析，还可利用化合物的吸收峰特性进行定性分析m】。目前，应用高效液相色谱技术检测饲料中苯乙醇胺A的方法未见报道。本实验通过对苯乙醇胺A在液相色谱柱上分离条件及紫外吸收光谱的研究，根据不同类型饲料基质特点，对固相萃取前处理条件进行优化，建立了饲料中苯乙醇胺A超高效液相色谱检测方法。2实验部分2．1仪器与试剂Acquity超高效液相色谱仪配二极管阵列检测器(美国Waters公司)；48孔正压

6、固相萃取仪(美国J2Scientific公司)；VX一Ⅲ多管涡旋振荡器(北京踏锦科技有限公司)；BP211D电子分析天平(0．01mg，德国赛多利斯公司)；3K15高速冷冻离心机(美国Sigma公司)；PCX混合阳离子交换固相萃取柱(60mg／3mL，天津博纳艾杰尔科技有限公司)。苯乙醇胺A标准品(纯度i>99．8％，德国WITEGA公司)；甲酸、甲醇(色谱纯，美国FisherScientific公司)；乙腈(色谱纯，美国Tedia公司)；氮气(纯度≥99．2％，北京诚为信气体销售公司)。实验用水为2012~7-16收稿

7、；2012．10-29接受本文系公益性行业(农业)科研专项经费(No2O1203O88_o1)资助E—mail：loveenfqCC@126．com390分析化学第41卷D11911超纯水机(美国ThermoScientific公司)纯化的超纯水。2．2饲料样品3个空白饲料样品为市售某品牌生长肥育猪配合饲料，40％浓缩饲料和4％添加剂预混合饲料，经液相色谱一串联质谱法⋯检测均不含苯乙醇胺A。2个阳性饲料样品为农业部执法监测中查扣的2个品牌生长肥育猪添加剂预混合饲料。2．3溶液配制标准溶液：准确称取苯乙醇胺A标准品0．01

8、g，用甲醇溶解并定容至50mL，配制成200mg／L标准储备溶液。此溶液于4℃冰箱中可保存6个月以上。准确移取适量标准溶液储备液，用0．1％甲酸-甲醇(9：1，)稀释，配制成100，80，50，20，5，1，0．5和0．1mg／L标准溶液工作液，现配现用。提取液：提取液A为甲酸．甲醇(1：999，)；提取液B为0．1