离子排斥色谱法测定生脉注射液中的有机酸.pdf

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1、第4O卷分析化学(FENXIHUAXUE)来稿摘登第3期2012年3月ChineseJournalofAnalyticalChemistry489～490DOI：10．3724／SP．J．1096．2012．10799离子排斥色谱法测定生脉注射液中的有机酸刘瑞聂黎行孙焕李涛王钢力林瑞超(北京中医药大学中药学院，北京100029)：(中国食品药品检定研究院，北京100050)(瑞士万通中国有限公司中心实验室，北京100005)1引言生脉注射液是由红参、麦冬和五味子3种药材经提取后制成的灭菌水溶液，为国家中药保

2、护品种，具有益气养阴，复脉固脱的功效。前期的分析实验表明，生脉注射液中含有有机酸类成分。根据生脉注射液的生产工艺和3种药材的的化学成分研究报道，分析生脉注射液中的有机酸主要来源于五味子。五味子含有柠檬酸、苹果酸、琥珀酸等多种有机酸成分。目前，有机酸的分析方法有气相色谱法Ⅲ、高效液相色谱法【2_、毛细管电泳法嘲及离子色谱法。这些方法专属性差或样品制备繁琐，而离子排斥色谱法(IEC)样品前处理简单[5】，准确度高，重现性好，适合于同时定量分析多种有机酸。本研究利用离子排斥色谱法对生脉注射液中的主要水溶性有机酸进

3、行了分析，结果稳定可靠。2实验部分2．1仪器与试剂850离子色谱仪(瑞士Metrohm公司)，配备电导检测器、英蓝超滤系统、magiCNet工作站；SartoriusBT224S型电子天平。生脉注射液由国内4个厂家提供。柠檬酸、苹果酸、琥珀酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；HSO4(分析纯，北京化工厂)；丙酮(色谱纯，J．T．BakerUSA)；实用用水为Millipore高纯水。2．2对照品及供试品溶液的制备准确称取柠檬酸119．2mg，苹果酸130．3mg，琥珀酸55．5mg，置于50mL容量瓶中

4、，加水稀释至刻度得对照品储备液，用水稀释配成系列浓度的混合标样；取生脉注射液2mL于50mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，经0．45txm滤膜过滤，取续滤液。2．3色谱条件TransgenomicSep—ION-300色谱柱(300mm×7．8111121i．d．，8m)；淋洗液：5mmol／LH2SO4：丙酮(95：5，／)；进样体积20，流速0．4mL／min，柱温70℃。抑制系统：100mmol／LLiC1。3结果与讨论3．1TransgenomicSep-ION-300色谱柱分离机理Transgen

5、omicSep-ION-300色谱柱的填料是完全磺化的聚苯乙烯仁乙烯苯(PS／DVB)共聚物，因填料完全磺化，填料表现为带负电荷的球体，不带电荷的分析物可被填料吸附。这种平衡可由有机酸的酸解离常数(pKa)调节。因此，分析物按离子排斥的机理得到分离，并按pKa的顺序先后洗脱。生脉注射液中主要含有的3种有机酸：柠檬酸、苹果酸和琥珀酸，它们的pKa值分别为3．13，3．40和4．21，保留时间分别为13．9，16．6和l9．7min，实验结果与TransgenomicSep-ION-300色谱柱的分离机理相互印

6、证。3．2色谱条件的优化本实验分别考察了不同浓度的HSO，以及不同配比的H：SO／Acetone等多种淋洗液。结果表明，在淋洗液中加入丙酮，可以有效改善有机酸的峰形，提高灵敏度，同时提高目标化合物柠檬酸、苹果酸、琥珀酸与杂质的分离度；而HSO和丙酮的浓度对实验结果影响不大，因此通过几组实验对比，并考虑实验时间和成本等因素，最终选用5mmol／LHSO和5％Acetone为有机酸分析的淋洗液。对柱温也进行了考察，结果表明，选取高柱温7O℃有利于改善峰形，提高分离度。采用LiC1为再生液，由于Li的电导率比H低

7、，经过抑制后，将淋洗液中的H：SO转化为电导率、更低的Li：SO，降低背景，提高灵敏度。在上述确定的色谱条件下，对照品及样品的典型色谱图见图1。3．3线性关系及检出限取适量对照品储备液，稀释成系列浓度的混合标样，采用本方法测定柠檬酸、苹果酸和琥珀酸分别在7．45~476．5mg／L，8．14~521．0mg／L和3．47~222．0mg／L范围内呈良好的线性关系；检出限分别为0．8，0．5和0．8mg／L。3．4精密度、重复性和稳定性取混合对照品溶液重复进样6次，柠檬酸、苹果酸和琥珀酸峰面积RSD分别为2．

8、3％，1．4％和O．4％。取同一批注射液样品，平行制备6份供试品溶液，测定含量，柠檬酸、苹果酸和琥珀酸含量的RSD分别为1．4％，1．1％和1_3％。取同一份供试品溶液，分别于0，2，8，16和24h进样测定。结果表明，柠檬酸、苹果酸和琥珀酸在24h内稳定，RSD分别为1．3％，1．2％和2．3％。3．5回收率实验取有机酸对照品(柠檬酸122．8mg，苹果酸45．2mg，琥珀酸34．8mg)，置于50mL容量瓶中