油红O染色具体操作方法.doc

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1、脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上，脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。脂类的主要功能是氧化供能。脂肪主要存积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。在病理检验中，脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用的有苏丹Ⅲ，苏丹Ⅳ，苏丹黑及油红O等。脂肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。经研究认为组织中脂质在液态或半液态时，对苏丹染料着色效果最好。根据这一原理，适当提高温度

2、（37℃-60℃）对组织切片染色效果是有好处的。脂类染色，用冰冻或石蜡切片，以水溶性封固剂封固，如甘油明胶和阿拉伯糖胶等。一、苏丹Ⅲ(SudanⅢ)染色法：操作方法：（1）固定于10%甲醛的组织。（2）水洗后采用冰冻或石蜡切片。（3）经蒸馏水后，浸染于Harris苏木素或明矾苏木素中淡染1-2分钟。（4）自来水冲洗。（5）水洗后，移入70%酒精5秒钟。（6）投入苏丹Ⅲ染液中约30分钟或更长时间，置于56℃温箱中。（7）在70%酒精中洗涤5-10秒钟。（8）洗于蒸馏水中，然后将切片移于载玻片上。（9）切片移于玻片上，将切片周围的水分小心擦掉。（10）甘

3、油明胶封固。结果：脂肪呈橙红色或鲜红色或黑色，胆脂素呈淡红色，脂肪酸不着色，细胞核呈蓝色。试剂配制：1.苏丹Ⅲ染液配法：将0.15克苏丹Ⅲ溶解于100ml70%酒精或纯丙酮和70%酒精混合液中（各50ml），临用时过滤，所得滤液即为饱和浓度。注：浸染时，容器必须盖好，否则酒精或丙酮挥发，染料沉淀。2.甘油明胶配制：明胶40g蒸馏水210ml甘油250ml石碳酸结晶5ml先将明胶浸入蒸馏水中2小时或更长时间，然后加甘油和石碳酸，加热15分钟，摇搅直至混合液均匀为止。二、苏丹Ⅳ(SudanⅣ)染色法：苏丹Ⅳ又名猩红，是苏丹Ⅲ的衍生物，作为脂肪染剂，经各地

4、实验证明，其结果优于苏丹Ⅲ。其染色步骤与苏丹Ⅲ染法完全相同，从略。试剂配制：将1-2克猩红染剂加纯酒精70ml，10%氢氧化钠20ml，蒸馏水10ml，制成混合液，以微火加热，置37℃温箱中1小时，取出冷却后过滤，12小时后即可使用。注：此液5天内失效，如此看来，浪费较大，建议配制70%酒精饱和液，或纯丙酮和70%酒精饱和液，它们使用方便，且不易失效。结果：脂肪呈猩红色，比苏丹Ⅲ更为清晰。三、油红染色法：油红作为脂肪染色剂，其染色步骤简便，染色结果肯定，并且优于苏丹Ⅳ。试剂配制：油红O0.5g异丙醇（含量98%）100ml此为油红饱和液，可长期保存备

5、用。染色步骤：(1)冻切片(2)蒸馏水充分洗涤。(3)油红稀释液染10-15分钟，避光、密封。油红稀释液的配制：(4)取油红饱和液6毫升，加蒸馏水4毫升，静置5-10分钟后过滤后使用。(5)60%乙醇镜下分化至间质清晰。(6)水洗。(7)Marry氏苏木素复染核。(8)水洗。(9)甘油或甘油明胶封片。结果：脂肪呈鲜红色，细胞核呈蓝色，间质无色。注意事项：1.油红染色时应避免试剂挥发过多，否则易形成背景沉淀。2.60%乙醇分化，应于镜下控制至脂肪组织呈鲜红色，间质无色时为度。