基于双分子识别荧光猝灭法高选择性测定多巴胺.pdf

《基于双分子识别荧光猝灭法高选择性测定多巴胺.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第39卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第11期2011年11月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1711～1715基于双分子识别荧光猝灭法高选择性测定多巴胺颜梅葛慎光卢娟娟于京华(山东省氟材料重点实验室，济南大学化学化工学院，济南250022)摘要制备了以二硫基琥珀酰亚胺丙酸酯，4-巯基苯硼酸功能化CdTe量子点探针，对其进行X_射线光电子能谱和透射电镜表征。在431nm激发波长下，对探针及加入多巴胺后进行发射光谱扫描，最大发射峰红移，在最大发射波长处，多巴胺对合成的探针具有猝灭效应，且多巴胺对体系的猝灭程度与多巴胺的量呈

2、良好的线性关系，据此建立了一种直接、灵敏、选择性好的测定多巴胺的方法。在最佳条件下，多巴胺的其线性范围为0．02~20．0gmol／L，线性回归方程为AF=20．1+31．7C(gmol／L)，相关系数为R一0．987，检出限为4．9nmol／L。本方法已成功用于多巴胺注射液、血清及尿样中多巴胺的测定，结果满意。关键词双分子识别；荧光猝灭法；CdTe；量子点；多巴胺1引言多巴胺(DA)是一种重要的神经信息传递物质，脑内多巴胺的释放和吸收与精神分裂症和帕金森氏症密切相关]。因此，建立快速、灵敏、高选择、可靠的多巴胺分析方法对于神经生理学研究、疾病诊断及相关药物的质量控制均

3、有重要意义。目前，测定多巴胺的方法有电化学法[2]、色谱法和光谱法_I】1，这些方法中虽然有的灵敏度较佳、选择性较好和操作较简易，但是仍然不能满足目前要求高选择、高灵敏和快速的检测方式，限制了其使用范围，对于多巴胺的检测仍是一种挑战。量子点是一种发光纳米颗粒，与传统的有机荧光染料相比，量子点具有荧光量子产率高、光化学稳定性好等优良特性，是一种很有发展潜力的荧光探针。近年来，量子点广泛应用于生物成像、生物标记。同时，基于量子点的荧光增强或猝灭效应，量子点还应用于重金属离子的检测”和药物含量的测定。本研究采用二硫基琥珀酰亚胺丙酸酯(DSP)，4-巯基苯硼酸(MBA)中的巯基

4、与CdTe量子点相结合，DSP与MBA对CdTe进行功能化(MBA-DSP—CdTeQDs)，不仅能起到稳定CdTe的作用，同时它们能与多巴胺作用，具有双分子识别多巴胺的作用，多巴胺引起功能化探针聚合，使得探针荧光发生猝灭。双分子识别荧光猝灭法将双分子识别的选择性“和荧光猝灭法的高灵敏度[15,16结合，抗坏血酸与尿酸无需分离，对测定结果无影响。本方法采用量子点为发光源，多巴胺导致量子点聚集，引起量子点荧光猝灭，可直接测定多巴胺，据此建立了一种测定多巴胺的新方法。2实验方法2．1仪器与试剂F一4500型荧光光度计(日本岛津公司)；pHS一3C精密pH计(上海雷磁仪器厂)

5、；SYZ一550型石英亚沸高纯水蒸馏器(江苏金坛医疗器械厂)，JEM1230透射电子显微镜(日本)，PHI一5000CESCAX一射线光电子能谱分析仪(美国PHI公司)。CdC1·2．5H：O(AR，上海化学试剂公司)；碲粉，二硫基琥珀酰亚胺丙酸酯(DSP)、4-巯基苯硼酸(MBA)(AR，中国医药化学试剂公司)；硼氢化钠(AR，天津环威精细化工有限公司)；PBS缓冲溶液：分别准确称取17．91gNa2HPO·12H2O和7．80gNailPO·2H20溶于水中，定容至100mL，调整两种溶液的混合比，可得到不同pH值的PBS缓冲溶液；所有试剂纯度至少为分析纯，实验用水

6、为二次去离子水。201卜04-09收稿；2011一O5—12接受本文系国家自然科学基金(Nos．21175058，51003039)，山东省自然科学基金(No．ZR2011BQ019)，山东省科技发展计划(Nos．2011GGB01153，2009GG2【)003O22)资助*E—mail：chm_gesg@ujn．edu．cn分析化学第39卷2．2MBA—DSP—CdTeQDs的制备将0．0694gCdC1：·2．5HO溶解在100mL超纯水中，磁力搅拌除氧30min后加入20pL1mmol／LMBA与10gL1mmol／LDSP，磁力搅拌30min，用1mol／LN

7、aOH溶液调节至pH9．0，然后加入50mL超纯水。在NaHTe溶液加入过量50mmol／LH：SO，将产生H：Te气体；在磁力搅拌下，通入cd2溶液，加热回流1～7h，得到MBA—DSP—CdTeQDs探针。2．3实验方法多巴胺的羟基和氨基分别与功能化量子点探针表面的MBA和DSP的结合，导致探针聚集(图1)，引起荧光猝灭，取不同量多巴胺，依次加入0．4mLMBA—DSP—CdTeQDs，1．5mLpH7．4的PBS缓冲溶液于10mL比色管中，稀释至刻度；室温下放置10min，于激发波长431nm下进行荧光测定。在最大发射波长下测定探针