光激化学发光技术介绍.ppt

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1、LightInitiatedChemiluminescenceAssay光激化学发光（LiCA）光激化学发光（LiCA）介绍以高分子微粒为基础两种微粒近距离离子氧能量传递主要特点：高灵敏度低本底稳定均相免洗广泛应用于生物分子间的相互作用微粒的组成感光微粒内含感光化合物发光微粒内含发光化合物和镧系元素微粒直径188nm，表面覆盖水凝胶共价连接增大的表面积成百上千个生物分子，捕获目标分子LiCA发光原理核心原理是能量的近距离转移转移的介质是高能态离子氧红色激光680nm照射，感光微粒释放离子氧（4微秒），传播直径200nm，发光微粒（520～618nm），高能级的光反应的基础有

2、赖于两种微粒的相互接近反应体系中，微粒的浓度很低，碰撞机率很低，本底信号微弱原理(1)发射光520-620nm发光微球1O2AB激发光680nm感光微球200nm原理(2)激发光680nm感光微球A发光微球CO2-LiCA的技术特点（一）高灵敏度信号产生逐级放大的结果每个感光微粒释放出近6万个离子氧离子氧作用于二甲基噻吩，产生大量紫外光紫外光激发镧系元素实际检测能力为10-15摩尔理论检测能力为10-18摩尔LiCA的技术特点（二）低本底时间分辨模式采集光信号（延迟150ms），天然荧光的寿命小于100ns采用680nm红光激发，生物样品中的荧光物质不敏感发射光的波长比激发

3、光的波长短，能量更高，有别于荧光，有效避免荧光物质干扰稳定均相环境使反应更充分免洗操作杜绝随机误差和交叉污染感光和发光的有机分子受到微粒的保护，环境稳定和安全溶液中的氧浓度是一个常数不易受到pH值、离子强度和温度的影响LiCA的技术特点（三）临床免疫的各项检测生命科学的基础研究新药的筛选标记简便检测过程简单广泛应用基本包被模式GG-Streptavidin（SA）FG-Antibody（Ab）基本反应模式biotin-antigenprimaryAbsecondaryAb(orproteinA,G,LA)应用类型配体－受体激酶蛋白－蛋白免疫蛋白酶蛋白－DNA配体－受体(1)

4、TNFa-sTNFR1Biotinanti-TNFR1IgGFG-TNFaProteinA-sTNFR1配体－受体(1)TNFa-sTNFR1GG-SABiotinanti-TNFR1IgGFG-TNFaProteinA-sTNFR1配体－受体(1)TNFa-sTNFR1GG-SABiotinanti-TNFR1IgGFG-TNFaProteinA-sTNFR1配体－受体(2)环磷酸腺苷cAMPBiotinFG-cAMPanti-cAMP-配体－受体(2)环磷酸腺苷cAMPGG-SABiotinFG-cAMPanti-cAMP-激酶AktBiotinanti-Gsk3IgG

5、FG-Gsk3ProteinA-激酶AktBiotinanti-Gsk3IgGFG-Gsk3ProteinA-激酶AktGG-SABiotinanti-Gsk3IgGFG-Gsk3ProteinA-Akt磷酸化激酶AktGG-SABiotinanti-Gsk3IgGFG-Gsk3ProteinA-Akt蛋白－蛋白BiotinFG-p53Anti-GST-p53/HDM2HDM2-GST蛋白－蛋白GG-SABiotinFG-p53Anti-GST-p53/HDM2HDM2-GST免疫(1)肿瘤坏死因子TNFaBiotinFG-anti-TNFaanti-TNFa-TNFa免疫

6、(1)肿瘤坏死因子TNFaGG-SABiotinFG-anti-TNFaanti-TNFa-TNFa免疫(2)Biotinanti-TNFaFG-anti-TNFaProteinA-TNFa肿瘤坏死因子TNFaGG-SA免疫(2)GG-SABiotinanti-TNFaFG-anti-TNFaProteinA-TNFa肿瘤坏死因子TNFa蛋白酶(1)GG-SABiotinFG-substrateanti-digoxigenin-组织蛋白酶CathepsinD-digoxigeninCathepsinD水解蛋白酶(2)ACEBiotinFG-angiotensinIanti-

7、angiotensinII-ACE切割蛋白酶(2)ACEGG-SABiotinFG-angiotensinIIanti-angiotensinII-蛋白－DNAERa-DNABiotinFG-ERaanti-digoxigenin--digoxigeninDNA蛋白－DNAERa-EREGG-SABiotinFG-ERaanti-digoxigenin--digoxigeninDNA当前成功应用实例HBsAgGG-SABiotin-Anti-HBsAnti-HBs-FGHBsAgAnti-HBsGG-SABioti