临床血液学检验--红细胞酶缺陷性贫血及其实验诊断.doc

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1、临床血液学检验一红细胞酶缺陷性贫血及其实验诊断-、红细胞酶代谢与功能二、红细胞酶缺陷的检验及其应用三、红细胞酶缺陷性贫血的实验诊断一、红细胞酶代谢与功能1.维持红细胞能量代谢的主要酶（1）与糖代谢有关的酶：丙酮酸激酶（PK）、2,3-二磷酸甘油酸（2,3-DPG）,葡萄糖6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）等。（2）谷胱甘肽还原酶系统。（3）高铁血红蛋白还原酶系统。2.红细胞酶的功能改变与酶缺陷红细胞酶缺陷多系遗传性,因其结构基因突变引起酶的活性减低、增加或止常。酶缺乏者常有程度不等的溶血，多表现为慢性非球形红细胞溶血性贫血，部分对多种氧化型药物敏感，其中以G-6-PD和PK较常见。（1）无氧

2、酵解途径酶缺乏：PK缺乏较常见。（2）戊糖旁路酶缺陷：最常见有葡萄糖6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）o（3）核苜酸代谢酶缺乏：有喀碇5,核昔酸酶（P5,N）、腺苜酸激酶（AK）、腺苜脱氨酶（AD）增多或缺乏，后者活性过高引起代偿性溶血性贫血。酶缺陷不引起溶血：有乳酸脱氢酶（LDH）,红细胞缺乏的是LDH-1,它呈常染色体显性遗传。其酶活性不足正常人的10%,无溶血发生。二、红细胞酶缺陷的检验及其应用1.高铁血红蛋白还原试验2.变性珠蛋白小体检查3.G-6-PD测定（荧光斑点试验和G-6-PD活性检测）4.丙酮酸激酶测定1.高铁血红蛋白还原试验（1）原理：在血液中加入亚硝酸盐使红细胞中的亚铁

3、血红蛋白变成高铁血红蛋白，正常红细胞的G-6-PD催化戊糖旁路使NADP（氧化型辅酶II）变成NADPH（还原型辅酶,其脱的氢通过亚甲蓝试剂的递氢作用而使高铁血红蛋白（Fe'+）还原成亚铁血红蛋白（Fe2+）,通过比色可观察还原的多少。当G-6-PD缺乏时，高铁血红蛋白还原率下降。参考值：正常人高铁血红蛋片还原率＞75%（脐带血277%）o（2）临床意义：G-6-PD缺乏时，高铁血红蛋白还原率下降。中间缺乏（杂合子）为31%〜74%,严重缺乏（半合子或纯合子）＜30%。2.变性珠蛋白小体检查（1）原理：G-6-PD缺乏的病人血样加入乙酰苯月井于37°C孵育2〜4小时，用煌焦油蓝染色观察红

4、细胞中珠蛋白小体的生成情况，计算含5个及以上珠蛋白小体的红细胞的百分率。参考值：正常人含5个及以上珠蛋白小体的红细胞一般V30%。（2）临床意义：G-6-PD缺乏症常高于45%,故可作为G-6-PD缺乏的筛检试验。但还原型谷胱甘肽缺乏症也增高；不稳定血红蛋口病含小体的细胞百分率为75%〜84%,HbH病和化学物质中毒时也增高。1.G-6-PD测定：包括荧光斑点试验和G-6-PD活性检测。(1)原理：在G-6-PD和NADP4■存在下，G-6-PD能使NADP’还原成NADPH,后者在紫外线照射下会发出荧光。NADPII的吸收峰在波长340nm处，可通过单位时间生成的NADPII的量來测定

5、G-6-PD活性。参考值：正常人有很强荧光。正常人酶活性为(4.97±1.43)U/gHb。(2)临床意义：G-6-PD缺陷者荧光很弱或无荧光；朵合子或某些G-6-PD变异者则可能有轻到中度荧光。G-6-PD缺乏者酶活性减少。2.丙酮酸激酶测定：包括荧光斑点试验和PK活性检测。(1)原理：在二磷酸腺背(ADP)存在的条件下丙酮酸激酶(PK)催化磷酸烯醇丙酮酸(PEP)转化成丙酮酸，在辅酶I还原型(NADH)存在情况下，丙酮酸被LDH转化为乳酸，若标记荧光于NADH上，此时有荧光的NADH变为无荧光的NADo参考值：正常荧光在20min内消失。(15.0土1.99)TU/gHb(37°C)

6、(ICSH推荐Blume法)。(2)临床意义：PK严重缺乏者荧光60min不消失；PK中间缺乏时荧光25-60min消失。纯合子PK值在正常活性到25%以下，杂合子为正常25%〜50%。三、红细胞酶缺陷性贫血的实验诊断1.红细胞G-6-PD缺陷症临床上按临床表现将G-6-PD缺乏症分为4种类型：蚕豆病、急性溶血性贫血、新生儿高胆红素血症、先天性非球形红细胞性溶血性贫血。G-6-PD递氢功能J-NADP还原为NADPHI-GSSG还原为GSHJ-GSSG-Hb或高铁Hb在红细胞蓄积一变性形成Heinz小体一被脾脏扣留、巨噬细胞吞噬破坏一溶血GlucoseG6PDGlucose6Phosph

7、ateATPNAADR^NADPHGSSGGSHogluconateG-6-PD在糖代谢屮的作用BasementmembraneofspleenSpleniccordRedcelwithHeinzbodiesFigure7.10SplenicsinusReseatingofredcelmembrane,leavingbiteoutdeformityUndeformableHeinzbodieslomawaySchematicrepr