氨氮、亚硝态氮对肿瘤细胞生物学的影响.pdf

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1、InnuenceofAmmoniaNitrogenandNitriteNitrogenonThmorCeUBiologyADissertationSubmi慨dtomeGraduateSchoolofHenanUniVersi够mP枷alFul舢mentofmeRequ沁m咄fortIleDe舯eofM嬲terofMediciIleBy三觑拖eSupervisor：Pro￡Hu锄gmChaoshenApril，2014关于学位论文独立完成和内容创新的声明本人向河南大学提出硕士学住中请。本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立完成的，对

2、所研究的课题有新的见解。据我所知，除文中特别加以说明、标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括其他人为获得任何教育、科研机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的回事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并袁示了谢意：i．；．，?。=I_‘一’j学位争豪j鼍擘住≤淼≥≤：：2：兰麴!!：些垦i。≤，爹囊二j，ij警蜘Ij罐年?箩月p日一j{，、、r__‘攀。关于拳值论文著作杈馕用授权书I；j；¨．一、oj、、：曩j本人经河南大学审核批准搜誉硬士譬馋?作为学位论文的作者，本人完全了解并同意河南表学有关保

3、留誊使甥譬簪圣每嚣的要求，即河角大学有权向国家图书馆、科研信息机构、数据收集机构积本校图书馆等提供学位论文(甄质文本和电子文本)以供公众检索、查阅。』本人授权河南犬学出于宣扬、展览学校学术发展和进行学术交流等目的。．．可以采取影印、缩印、扫描和拷贝等复制手段保存、汇编学位论文(纸质文本和电子文本)。(涉及保密内容的学位论文在解密后适用本授权书)学住获得者(学住论文作者)签名：童垒进邑20lV年’月lo曰学位论文指荆币辐经鳢20J印年罗月J砂日摘要随着农业化肥，工业防腐剂的广泛应用，自然界水体和土壤中氨氮，硝态氮，亚硝态氮含量逐年增加。亚硝酸盐是常见

4、的亚硝态氮，硫酸铵是常用的化肥，近年来在环境中负荷不断加大。与此同时，流行病学研究显示，氨氮污染严重的地区癌的发病率和死亡率逐步增高，尤其是肺癌近年来最为严重。深入研究氨氮与肺癌的发生、发展关系有非常重要的意义。目的：选择肺癌为研究对象，氨氮及亚硝酸盐对于肺癌细胞演变的生物学作用。在模拟的肿瘤微环境中研究氨氮及亚硝态氮对于肺癌细胞的侵袭作用所起的作用。为进一步了解亚硝酸盐和肺癌的关系补充依据。方法：用小鼠成纤维细胞L929和小鼠肺癌细胞LLc细胞共培养，体外模拟肿瘤微环境，制作细胞模型。免疫细胞化学法检测Q．平滑肌肌动蛋白(Ⅱ一sMA)表达；以亚硝

5、酸钠代表亚硝态氮，以硫酸铵代表氨氮。体外细胞增殖指标采用MTT细胞增殖活性；PI染色流式细胞术分析细胞周期；Hoechst33258荧光染色计数细胞分裂指数；细胞迁移和侵袭能力判定采用划痕实验和Trallswell侵袭实验，结合细胞爬片细胞形态变化判定上皮问质转化(epithelial．to—mesenc埘maltransition，EMT)的发生。免疫荧光法检测活性氧的含量。结果：MTT结果显示：对LLC细胞，亚硝酸钠、硫酸铵、亚硝酸钠硫酸铵混合液有浓度依赖性增殖抑制作用(氏O．05)，亚硝酸钠在0．8mg。L～一1．0mg·L～，细胞增殖有小幅

6、增加；硫酸铵浓度在1．0mg·L～．1．8mg·L～，细胞增殖有小幅增加；亚硝酸钠和硫酸铵混合液对细胞增殖抑制作用明显比单纯亚硝酸钠组和硫酸铵组低(Pl

7、组化法检测到共培养体系中一些细胞的Q．平滑肌肌动蛋白(Q．SMA)表达呈阳性，证实这些细胞已转化为肿瘤相关成纤维细胞(carcinoma．associated硒roblasts，CAFs)。经MTT结果显示对L929一LLC细胞，亚硝酸钠在O．8mg·L～一1．0mg·L～，对细胞增殖有促进作用；硫酸铵浓度在1．Omg·L～．1．8mg·L一，48小时，对细胞增殖有促进作用，亚硝酸钠或硫酸铵对L929．LLC细胞促增殖作用强于单独培养的LLC和L929细胞(氏o．05)；亚硝酸钠和硫酸铵混合液浓度在0．1mg·L-l一1．8mg·L。1对细胞增殖有

8、促进作用，其中浓度在1．8mg·LJ时，对细胞增殖促进作用最显著(P<0．05)；1．8mg·L。1亚硝酸钠硫酸铵混合溶液