MS培养及配置标准及过程.doc

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1、MS培养基配制标准操作程序曲昙(0)实验步骤1MS培养基母液的母液的配制由于组培的植物不同，需要配制不同的培养基，为减少T件量，可把药品配成浓缩液。有些微量元素和有机成分成分浓度极低，因此，先配制成母液的母液。建议浓度如下表:药品名称配制的终浓度配制50ml的总质量(g)烟酸0.01g/ml0.5VB60.1g/ml5甘氨酸0.2g/ml10NaMo04.2H200.05g/ml2.5CUSO4.5H2O0.05g/ml2.5KI0.1g/ml5H3BO30.062g/ml3.1MnSO4.H2O0.169g/ml8.45ZnSO4.7

2、H2O0.172g/ml8.6C0O.6H2O0.05g/ml2.5VB10.1g/ml5母液的母液的配制过稈：(1)根据表屮的浓度，称取50ml体积的药品的质量。(2)加入到相应的溶液中,定容至50mlo(3)放入密封50ml级胶管屮，・20°C保存。2MS培养基母液浓度表：(1)MS-A(macro)：为工作液浓度的50倍NH4NO3KNO341.25g/500ml47.5g/500mIMgSO4・7H2O9.25g/500mlKH2PO49.25g/500ml(2)MS-B(micro)：为工作液浓度的100倍H3BO30.124

3、g/200mlMnSO4・4H2O0.338g/200mlZnSO4・7H2O0.172g/200mlCuSO4・5H2O0.0005g/200mlCoCI2・6H2O0.0005g/200mlKI0.0166g/200mlNa2Mo04・2H2O0.005g/200ml(1)MS-C：为工作液浓度的100倍CaCI2・2H2O22.0g/500ml（4）MS-D：为工作液浓度的100倍烟酸0.01g/200mlVB60.01g/200mlVB10.002g/200ml甘氨酸0.04g/200ml（5）MS-E：为工作液浓度的100倍N

4、a2-EDTA3.725g/500mFeSO4・7H2O2.875g/500m3母液的配制MS-A：称取NH4NO341.25g>KNO347.5g、MgSO4・7H2O9.25g、KH2PO49.25g,蒸憾水溶解，容量瓶定容至500mlo4°C的冰箱屮保存。MS-B：吸取母液的母液如下，熬憎水定容至200ml。4°C的冰箱屮保存。母液的母液量母液终浓度H3BO30.124g/200mlMnSO4・4H2O0.338g/200mlZnSO4・7H2O0.172g/200mlCuSO4・5H2O0.0005g/200mlCoCI2・6H

5、2O0.0005g/200mlKI0.0166g/200mlNa2MoO4・2H2O0.005g/200mlMSG称取CaQ2•2H2O22.0g熬憎水溶解，容量瓶定容至500ml04°C的冰箱屮保存。MS-D：吸取母液的母液如下，蒸馄水定容至200mL4°C的冰箱屮保存.烟酸母液的母液量母液终浓度0.01g/200mlVB6VB1甘氨酸0.01g/200ml0.002g/200ml0.04g/200mlMS-E：称取Na2・EDTA3.725g、FeSO4-7H2O2.875g蒸镉水溶解，容量瓶定容至500mlo4C的冰箱屮避光保存。

6、4MS培养基基木T作液的配制MS培养基基本T作液质最表组成成分数量(mg/l)NH4NO31650KNO31900CaCI2・2H2O440MgSO4・7H2O370KH2PO4170KI0.83H3BO36.2MnSO4・4H2O22.3ZnSO4・7H2O8.6Na2MoO4・2H2O0.25CoCI2-6H2O0.025组成成分数量(mg/l)Na2・EDTA37.3FeSO4・7H2O27.8CuSO4・5H2O0.025蔗糖30肌醉100.0烟酸0.5盐酸毗哆醇0.5甘氨酸2.0盐酸硫钱等0.4pH5.8（1）配制1升工作液，

7、烧杯屮放入700ml左右的蒸锚水，按顺序分别吸取MSA母液20ml、MSB母液10ml、MS-C母液10ml、MSD母液10mkMS-E母液10ml。（2）加入固体蔗糖30g（根据具体实验调节浓度），溶解。（3）加入所需的激素。定容至1000ml。（4）0.1-1mol/l的HCI或NaOH调整pH值。（5）如果配制固体培养基加入一定浓度的琼脂。琼脂浓度为10%〜15%。（6）液体培养基可选择高温高压灭菌和过滤消毒2种方法。間体培养基采用高温高压灭菌方法。倒入三角瓶等培养器血屮，封口消毒。（7）T.作液配制的注意事项：由于培养基内有丰富

8、的营养物质，极利细菌和真菌繁殖，造成污染，影响组培的成功，一般有高温高压消毒和过滤消毒两种方法。高温高压消毒：一般用消毒锅消毒，注意消毒锅不能装的过满，锅内保持1.1Kg/cm2的压力，温度120°C左右，