HPLC有关物质分析方法验证.ppt

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1、化学药物有关物质HPLC分析方法验证一、目的了解与规范有关物质方法学验证。二、验证内容1、专属性2、检测限、定量限、3、线性范围4、响应因子5、精密度(重复性、中间精密度和重现性)6、准确度7、耐用性指有其他成分（合成中间体杂质、降解物、副产物等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性，能反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力，是指该法用于复杂样品分析时是否受到相互干扰程度的度量。1、专属性1、专属性试验方法空白溶剂系统适用性溶液5针中间体及样品中间体与样品混合溶液破坏性试验（酸、碱、氧、高温、光照等，用到不同溶剂的，溶剂也要进样对照）系统适用性溶液1针

2、图谱打印：中间体与样品混合溶液、破坏性试验中主成分与主要杂质要打印出光谱纯度和分离度数据，如short+spectum格式打印。系统适用必至少有一针用extendperformance格式打印。必要时提供3D图1、专属性峰纯度结果峰名称纯度阈值结果峰名称保留时间RT相对保留时间RRT评价：1、各峰之间的分离状况。2、各峰的峰纯度情况。报告数据：(1)检测限(LOD)检测限系指试样在确定的实验条件下，被测物能被检测出的最低浓度或含量。是限度检验效能指标，无需定量测定，只要指出高于或低于该规定浓度即可。2、灵敏度LOD试验方法空白溶剂系统适用性溶液5针杂质对照品溶液进1针根据上一

3、针杂质对照品的S/N值进行稀释进样直到S/N为约3时，平行进样3针。系统适用性溶液1针图谱打印：杂质对照溶液及其稀释液均要以performance+noise格式打印。系统适用必至少有一针用extendperformance格式打印2、灵敏度(2)定量限(LOQ)指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度要求。2、灵敏度LOQ试验方法空白溶剂系统适用性溶液5针杂质对照品溶液进1针根据上一针杂质对照品的S/N值进行稀释进样直到S/N为约10时，平行进样3针。系统适用性溶液1针图谱打印：杂质对照溶液及其稀释液均要以performance+noise格式打印。

4、系统适用必至少有一针用extendperformance格式打印2、灵敏度2、灵敏度报告数据：检测限LOD浓度杂质.A杂质.B杂质.C杂质D杂质.E杂质.F杂质.G主成分定量限LOQ浓度杂质.A杂质.B杂质.C杂质D杂质.E杂质.F杂质.G主成分平均值RSD(1)线性:在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。线形通常用最小二乘法处理数据求得回归曲线的斜率来表示。数据要求：至少需要五个浓度考察线形，需提供相关系数、y截距（是检定的可能偏差）、回归斜率及方差等参数，应列出回归方程数和线性图。(2)范围：指达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的

5、高、低限浓度或量的区间。有关杂质测定应为被测杂质最低定量限至限度的150%。3、线性与范围3、线性与范围线性与范围试验方法（包括主成分和杂质）空白溶剂系统适用性溶液5针配制从定量限到杂质控制限度的150%的不同浓度样品不少于6个（一般包括定量限、控制限度约50%、100%、150%等浓度）。从低浓度依次到高浓度依次进样。系统适用性溶液1针图谱打印：系统适用必至少有一针用extendperformance格式打印其他图谱可用short格式打印。最后经calibration打出线性图谱及线性方程参数。3、线性与范围报告数据：提供标准曲线图斜率相关系数Y-截距评价：相关系数不得小于

6、0.9904、准确度准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。测定回收率的具体方法可采用“加样回收试验法”。加样回收试验：已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M4、准确度空白溶剂系统适用性溶液5针正常样品检测三份50%加杂样品检测三份100%加杂样品检测三份150%加杂样品检测三份系统适用性溶液1针图谱打印：系统适用必至少有一针用extendperformance格式打印，其他图谱可用short格式打印。4、准确度数据报告：规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备高、中、低三个不同浓度样品各测三次。计算

7、9次测定结果的平均值及RSD。平均值应为90%～110%及RSD小于10%。4、准确度2．杂质定量测定的准确度杂质的定量试验可向原料药中加入已知量杂质进行测定。如果不能得到杂质，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较，如药典方法或经过验证的方法。如不能测得杂质的相对响应因子，可在线测定杂质的相关数据，如采用二极管阵列检测器测定紫外光谱，当杂质的光谱与主成分的光谱相似，则可采用原料药的响应因子近似计算杂质含量（自身对照法）。已知杂质相对与主成分在HPLC上的响应比值计算方法：(1)可直接用主成分对照品及