《6种检测方法》PPT课件.ppt

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1、高效液相色谱六种定量方法原理及使用条件六种定量方法1、峰面积百分比法2、峰面积归一法3、外标法4、杂质检查法5、内标法加校正因子的主成分自身对照法不加校正因子的主成分自身对照法峰面积百分比法按各品种项下的规定，配制供试品溶液，取一定量注入仪器，记录色谱图。测量各峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积，计算各峰面积占总峰面积的百分率。某化合物百分含量（%）=简单的说就是配制溶液，进样，按峰面积百分比法读取含量。一般系统适应性主要考察分离度。（如：双乙酰阿昔洛韦。D-NAP方法，P4）峰面积Σ峰面积×100%优点：快速、简单、

2、无需考察系统重复性（进样量不严格）无需对照品缺点：测定误差大，本法通常只能用于粗略考察供试品中的杂质含量。除另有规定外，一般不宜用于微量杂质的检查。峰面积百分比法峰面积归一法在建立方法时，按各品种项下的规定，精密称（量）取杂质对照品和待测成分对照品各适量，配制测定杂质校正因子的溶液（一般为100%限度加样溶液），进样，记录色谱图，按式中：Ci—加样溶液中加入的杂质百分含量；Ai1—回收异丙醇中杂质的平均峰面积；Ai2—加样溶液中杂质的峰面积；Cs—加样溶液中主成份的百分含量；As—加样溶液中主成份的峰面积。计算杂质的校正因子。此

3、校正因子可直接载入各品种项下，用于校正杂质的实测峰面积。这些需作校正计算的杂质，通常定位或以主成分为参照，采用相对保留时间定位，其数值一并载入各品种项下。峰面积归一法按各品种项下的规定，配制供试品溶液，取一定量注入仪器，记录色谱图。测量各峰的面积，加入校正因子计算各组分面积及总峰面积。计算各组分折算后峰面积占总峰面积的百分比。公式如下：某化合物百分含量（%）=比面积百分比法多了一步校正因子计算。如双乙酰阿昔洛韦。若杂质含量较少，乘校正因子对总面积影响较小，可按结果×校正因子报告。若杂质含量较大或个数较多，乘校正因子对总面积影响较

4、大，需按峰面积乘校正因子重新计算总峰面积后再计算。（如：vcv有关物质2等）峰面积×响应因子Σ峰面积×响应因子×100%优点：快速、简单、无需考察系统重复性（进样量不严格）验证时需对照品，之后无需对照品。缺点：同峰面积百分比法。误差较大，但比百分比法准确。峰面积归一化法外标法建立方法时，按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品溶液和供试品溶液中待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算含量：含量（%）=（CR/CX）(AX/AR)*100式中CR——对照溶液中待

5、测组分浓度；CX——供试品溶液中待测组分浓度；AX——供试品溶液中待测组分浓度；AR——对照溶液待测组分峰面积。系统适应性中需考察重复性。基本原理：浓度和峰响应成线性。（如各产品项下含量方法，CPGBSA杂质A、基因毒性杂质等）外标法优点：外标法方法相对内标法简便，不需用校正因子，不论样品中其他组分是否出峰，均可对待测组分定量准确。对照品好找，用待测组分的纯品作为对照品。不足：1、进样量必须准确。此法的准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。由于微量注射器不易精确控制进样量，当采用外标法测定供试品中成分或杂质含量时，以定量环或

6、自动进样器进样为好。2、仪器及人员精密度要求较高。需控制实验条件稳定性。3、定期校正。4、只能每个待测组分均需进其对照溶液。但此外，为了降低外标一点法的实验误差，应尽量使配制的对照品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近。杂质检查法1、加校正因子的主成分自身对照法已知且有对照品杂质2、不加校正因子的主成分自身对照法未知或无对照品杂质已知杂质且有对照品的我们现在都加校正因子，未知杂质按1.0计。除另有规定外，校正因子大于等于1.0时，保留至小数点后1位，反之，保留至小数点后两位；结果为0.80~1.2之间，通常按1.0计，反之，杂质浓度

7、计算时，应乘以测试得到的校正因子。加校正因子的主成分自身对照法在建立方法时，按各品种项下的规定，精密称（量）取杂质对照品和待测成分对照品各适量，配制测定杂质校正因子的溶液，进样，记录色谱图，或根据线性检测结果计算。f=或f=计算杂质的校正因子。此校正因子可直接载入各品种项下，用于校正杂质的实测峰面积。这些需作校正计算的杂质，通常以主成分为参照，采用相对保留时间定位，其数值一并载入各品种项下。A杂/C杂A样/C样K样K杂加校正因子的主成分自身对照法需系统适应性考察：1、灵敏度考察：定量限最低要求在杂质一半限度以下。（可调节进样浓度

8、或进样量）2、系统适应性考察：通常含量低于0.5%的杂质，峰面积的相对标准偏差（RSD）应小于10%；含量在0.5%～2%的杂质，峰面积的RSD应小于5%；含量大于2%的杂质，峰面积的RSD应小于2%3、供试品溶液的记录时间，除另有规定外，一般为主成分色谱峰保留