微生物实验考核内容及汇总.doc

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1、微生物实验考核内容及汇总考核一1.1 大体观1.1.1葡萄球菌鉴别  （ 白色 金黄色 柠檬黄）1.1.2血琼脂平板1.1.3 SS琼脂平板1.1.4 生化管试验（1）糖发酵试验原理:多糖－→单糖－→丙酮酸－→酸性产物(或产酸产气)－→pH↓ －→指示剂呈酸性变色(若产气者有气泡出现)培养基：糖发酵管、半固体发酵管、微量发酵管（我们实验一般只用糖发酵管，不区分产气与否）试剂：酚红、溴甲酚紫等结果：若糖发酵管颜色呈 紫色，则为阴性；呈黄色，则为阳性应用：观察细菌对糖度的 分解情况，常用于肠道杆菌的鉴定注：钟老师在课上，还提到一种双糖试验。如果现象为培养基为黄色，则为肠道非

2、致病菌，上红下黄色，则为肠道致病菌，其他的记不得。（2）硫化氢试验：原理：细菌分解蛋白质中的含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐或铅盐结合生成黑色络合物。培养基：含硫酸亚铁或醋酸铅的培养基结果：培养基  变黑 为阳性；不变黑为阴应用：常用于肠道杆菌的鉴定（3）靛基质试验（吲哚试验）：原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。培养基：蛋白胨水试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛）结果：加入试剂后，培养基交界面出现玫瑰红色，为阳性培养基交界面为黄色或浅红色：为阴性（注：如果要鉴别，要自

3、己动手加试剂哦）应用：用于肠道杆菌的鉴定（4）尿素酶试验原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。培养基：尿素培养基试剂：酚红指示剂结果：培养基变红：阳性培养基不变色 阴性应用：肠杆菌科属间鉴定总结阳性现象：糖发酵黄色；硫化氢黑色；靛基质加试剂变玫瑰红 ； 尿素酶红色1.1.5 动力实验动力阳性  穿刺线清晰周围培养基澄清动力阴性  穿刺线模糊细菌向周围扩散生长，培养基浑浊1.1.6 真菌菌落真菌能分泌酶使有机物降解成可溶性营养成分，吸收至细胞内进行新陈代谢。大多数真菌营养要求不高，在沙保氏培养基(Sabouraud's smedium 含4

4、%葡萄糖 1.0%蛋白胨 pH4.0～6.0 )，22～28℃生长良好。大多于1～2周出现典型菌落。真菌菌落一般有三种类型。1．酵母型菌落，为单细胞真菌的菌落，形态与一般细菌菌落相似，以出芽形式繁殖，如新型隐珠菌。2．类酵母型菌落，外观似酵母菌落，但可见伸入培养基中的假菌丝，它是由伸长的芽生孢子形成，如白色念珠菌。3．丝状菌落，为多细胞真菌的菌落，由许多菌丝体组成。菌丝多数有隔分成多个细胞称有隔菌丝，有的菌丝无隔，称无隔菌丝。部分菌丝伸入培养基中吸收营养和水分，称营养菌丝；另一部分菌丝向空间生长称气中菌丝，能产生孢子的气中菌丝称生殖菌丝。有些真菌的气中菌丝形状特殊，呈球

5、拍状、螺旋状、鹿角状等是各种皮肤丝状菌鉴别的依据之一。丝状菌落呈棉絮状、绒球状、粉末状或石膏粉样，在下面和背面可显示各称不同色素。（找不到类酵母型的图，若某看客找到，希望与空间主人联系，先行谢过！！！）1.1.7亚碲酸钾血琼脂平板含有0.033%亚碲酸钾血清培养基上，白喉棒状杆菌 在生长繁殖能吸收碲盐，并还原为金属碲，使菌落呈黑色，为本属其他棒状杆菌共同特点。且亚碲酸钾能抑制标本中其他细菌的生长，故亚碲酸钾血琼脂平板可作为棒状选择培养基。1.2镜下观鞭毛 荚膜  异染颗粒（不算细菌的特殊结构，但是考试有要求）Ｇ＋　蓝色（下图为葡萄球菌）Ｇ－　红色考核二：油镜使用（1）将

6、集光器上升到最高位置，光圈开到最大。（2）转动转换器，使高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上垂直滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。（3）用左眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。（4）观察，分辨视野中的为革兰阳性菌（蓝色），还是阴性菌（红色），并填在卷子上（5）油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头上和标本上的香柏油擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。考核三3.1接种细菌（详情可见实验指导P63~65，以下内容较繁琐）（一）平板分区划线分离培养法【材料】1．大肠埃希菌和葡萄球菌

7、混合液2．琼脂平板【方法】       琼脂平板培养的方法很多，现以分区划线接种法为例。此方法可通过划线分离，充分利用培养基表面，分离出单个生长的菌落。1.在平板的底部用记号笔写上组别、标本名称或编号、日期等记号。（实验考忽略本步骤）2.右手握持接种环 (执笔式)通过火焰灭菌，冷却后，取一接种环上述细菌混合液。3.再以左手握持平板培养基，使平板略呈垂直方向，并靠近火焰周围，以免空气中杂菌落入。然后将蘸有菌液的接种环，先在培养基一角涂成薄膜，即1区。4.烧灼接种环，以杀死环上剩余的细菌，冷却后，将接种环再通过①区薄膜处作连续划线（使环面与平