轻工业微生物实验指导书.doc

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1、实验一培养基的制备与灭菌技术一、试验原理马铃薯中含有淀粉、蛋白质、脂类及多种维生素经煮沸后可把这些营养成分从中溶出以供酵母和霉菌生长需要，加入葡萄糖或蔗糖以补充微生物所需的碳源。此培养基为半合成培养基。二、实验目的：1、掌握培养基的制备方法，2、学会高压蒸汽灭菌技术。三、实验材料和仪器：1、马铃薯、葡萄糖（或蔗糖）、琼脂。2、烧杯、漏斗、试管、三角瓶、量筒、玻璃棒、纱布、棉花、细绳、牛皮纸、试管架、培养皿。3、手提式高压蒸汽灭菌锅、天平、电炉。四、实验方法与步骤：（1）选无芽、无腐烂的马铃薯、洗净、削皮、称40g切碎加水200ml,放入1000ml烧杯中煮沸0.5hr、冷却用纱布过滤去渣。

2、（2）在清液中加入4g葡萄糖溶解补水至200ml，此时到入一试管10ml。余下溶液加3.8g琼脂加热熔化。（3）试管分装：取玻璃漏斗装在漏斗架上，漏斗下连一橡胶管，与玻璃管嘴相接，橡皮管上夹一弹簧夹，培养基倒入漏斗，通过弹簧夹控制培养基的流量。（4）余下的培养基分装在两个250ml的三角瓶中。（5）高压蒸汽灭菌：把溶解完的培养基用棉塞塞上并用牛皮纸把棉花包住，在121℃，0.1Mpa下灭菌20min即可，灭菌时要注意放净阀气。取出灭菌物品时一定要等到压力降到零时打开灭菌锅盖。（6）斜面摆放：将分装灭菌后的琼脂培养基试管置于水平放置的试管上，凝固后即成斜面。（7）培养皿培养基的倾倒：先用酒精

3、棉球擦拭桌面及双手,在靠近酒精灯火焰的上方把冷却到45℃左右的培养基倒入培养皿内，每只倒入15ml左右。注意：温度太低培养基会凝固。五、思考题：1．培养基配制好后为什么要灭菌？2．蒸汽灭菌应注意几个问题？为什么？实验二微生物接种和无菌操作技术一、实验目的1、了解无菌操作在微生物接种过程中的重要性，掌握无菌操作的基本环节。2、掌握几种常用微生物的接种方法，为微生物的形态观察作准备。二、实验材料1、菌种（1）细菌大肠杆菌（Escherichiacoli），枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）,(2)酵母酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）,(3)霉菌黑曲霉（A

4、spergillusniger）2、培养基（1）肉汤培养基固体斜面培养基，液体培养基，半固体培养基，固体培养基。（2）PDA培养基液体培养基，斜面培养基，固体培养基。3、接种工具接种针，接种钩，接种环。10/104、酒精灯，标签纸，火柴，镊子，75%酒精棉球，试管架，电炉，铝锅，无菌平皿。三、实验方法与步骤1、斜面接种用接种环在肉汤斜面培养基上划密波蜿蜒曲线接种大肠杆菌和枯草芽孢杆菌，在PDA培养基斜面上用划直线和点接的方法分别接种酵母菌和霉菌。2、液体接种：用接种环在肉汤培养基液体中接种细菌，在PDA液体培养基中接种酵母菌。液体接种时取一环菌苔，沿管壁轻轻擦下菌苔，塞上棉塞轻摇试管。3、

5、穿刺接种：在肉汤培养基上接种细菌，在PDA培养基上接种酵母菌。4、平板接种：分别在不同的培养基平板上点接不同的菌种。四、结果记录1、斜面接种（1）检查斜面接种情况、绘制斜面生长草图。（2）分析斜面接种好坏的原因（3）保留斜面、以便观察形态时使用。2、液体接种观察记录细菌、酵母的液体培养特征，保留酵母液体培养液备用。3、穿刺接种（1）检查穿刺接种效果，绘制草图。（2）叙述不同微生物穿刺培养后的现象及原因。（3）分析穿刺接种好坏的原因。4、平板接种（1）检查平板接种的生长状况，有无污染（凡没接种地方长出菌落均为染菌）。（2）描述各个菌落的特征。实验三显微镜的使用、微生物观察和菌体大小测定一、实

6、验原理应月显微镜的成像原理，同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺，两尺配合使用，进行测量和运算，得出细胞的大小。镜台测微尺系一特制的载玻片（图1－3），它的中央是一具有刻度的标尺，全长为1mm，共划分为10大格，每一大格又分成10小格，每一小格长0.01mm，即10um。也有全长为2mm，共分200小格，每小格的长度不变。在标尺的外围有一小黒环，以便找到标尺的位置。图1－3镜台测微尺目镜测微尺是放在目镜内的一种标尺，它有固定式和移动式两种类趔。固定式目镜测微尺为一块圆形玻璃片，直径为20～21mm，如图1－4所示。在它的上面刻有各种形式的标尺，有为直线式的（图1一4A），有为网式的（图1

7、—10/104B）通常用以测量长度的标尺为直线式的，一般为5mm，分成5大格，每一大格分成10小格，共计50小格。也有用同样长度分为100小格的。网式目镜测微尺主要用以计算数目和测量物体的面积。在它上面刻有方格的网状标尺。方格的大小和数目各有不同，有25、36和49格，也有的一个正方形大格中划分100个方格，在中央的一个方格中再划分25个小方格。ABCD图1－4目镜测微尺A.直线式B.网式C.移动式（外形）D.移动式（内