试管法RH血型鉴定.docx

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1、试管法RH血型鉴定1．目的规范RhD血型鉴定实验，确保RhD血型鉴定结果的准确。2．职责此规程用于试管法RhD血型鉴定试验，血库工作人员应严格按照本操作规程进行检测。3．适用范围本规程适用于本院紧急输血患者的红细胞RhD血型鉴定检测操作。4．操作规程4.1器材和试剂4.1.1器材：离心机、试管、滴管、生理盐水、记号笔，显微镜（OLYMPUS）,载玻片,移液器，一次性吸头。4.1.2试剂：RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体），生理盐水；4.1.3原理：利用红细胞凝集实验可鉴定是否存在相应的抗原。Rh血型系统常见的临床意义较大的C,c，

2、E,e，D五种抗原中D抗原的临床意义最大，抗原性最强且出现频率高，故一般只进行RhD抗原的鉴定。D抗原阳性者被称为Rh阳性，反之为Rh阴性。4.2标本采集4.2.1标本要求：抽取EDTA抗凝血2ml，3400转/分离心5分钟分离血浆，抗凝标本应无溶血，标签齐全。4.2.2标本运输：室温运输。4.2.3标本拒收标准：细菌污染，溶血标本，标签不齐全不能作测定。4.3操作步骤4.3.1实验前准备：压积红细胞制备：供血者及受血者血标本离心后，取洁净试管加500ul生理盐水，加入25ul压积红细胞，混匀约为5％的红细胞悬液。1）取洁净试管1支，标明

3、RhD,用加样器加入50ul（或用试剂瓶吸管各加入1滴）RhD（IgM）分型试剂；2）加入50ul（或用一次性吸管加入1滴）5％被检者红细胞悬液；3）轻轻混匀，500g，离心1min（或1000g，离心15sec）；4）观察上清液是否存在溶血现象。5）轻轻摇动试管，将试管底部的红细胞扣重新悬浮于上清液中。6）以肉眼观察、分析并记录结果。应观察是否有凝集或溶血现象；如有凝集，应描述凝集强度；如无凝集，应在低倍显微镜下观察；7）实验结果无凝集或弱凝集。（应根据实验室现有试剂条件加做抗人球蛋白实验以确认是否为弱D表型，或外送检测确认）5.注意事

4、项5.1常见导致假阳性的原因1）受检细胞被免疫球蛋白致敏2）高蛋白介质可能导致的缗钱状形成3）标本抗凝不当，纤维蛋白凝块的干扰4）存在意外抗体5）红细胞多凝集现象6）实验器材不洁净5.2常见导致假阴性的原因1）红细胞与抗血清比例失调2）漏加或错加试剂血清3）试剂效价降低4）离心后摇动试管时用力过度