植物胰岛素分离纯化及降糖作用实验动物探究.doc

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1、植物胰岛素分离纯化及降糖作用实验动物探究摘要：目的：探寻大量纯化苦瓜中植物胰岛素的技术方法。方法：采用盐析、阴离子交换层析和凝胶过滤层析三步技术纯化苦瓜中植物胰岛素，并行电泳、层析和动物实验鉴定，壳聚糖包封。结果：目的提取物于11000处出现一条电泳带，相对迁移率与胰岛素相同；壳聚糖包封后苦瓜中植物胰岛素的降糖作用更显著。结论：本方法可适用于大量纯化苦瓜中植物胰岛素。关键词：植物胰岛素；壳聚糖；分离纯化中图分类号:R285文献标识码：A文章编号:1673-7717(2011)04-0825-03SeperationandPurificationofPlantInsulinandItsHypo

2、glycemicEffectontheExperimentalAnimalsJUNXu[sup]1[/sup],WUPeng[sup]1[/sup],HANLin[sup】1【/sup],ZHANGZhong[sup】1【/sup】，HUANGZhu-qing[sup]2[/sup](1.ScienceLaboratoryCenterShenyangmedicalcollege,Shenyang110034,Liaoning,China；2.LiaoningVocationalCollegeofPharmacy,DepartmentofHea1th,Shenyang110101,Liaoni

3、ng,China)Abstract：Objective：Toexploreatechnicalmethodtopurifytheplantinsulininthebittermelon.Methods：applyingthree~stepmethodstopurifyinsulinfrombittermelonthesearesaltingout,ionexchangechromatographyandgelfiltrationchromatography.Andthanusingelectrophoresischromatography,animalexperimentsandchitos

4、anenvelopmentmethodstoidentifyit.ResuIts：Theextractsappearedelectrophoresisbandatthe11000molecularweight,andhadthesamerelativemobilitywithinsulin・Theplantinsulinfromthebittermelonshasthehypoglycemiceffectsignificantlyafterthechitosanenvelopmentmethods・Conclusion：Tostabilizedextracttheplantinsulinfr

5、omthebittermeloncandependonthismethodmentiondinthispaper・Keywords：PlantinsulinChitosanPurifay现代医学证明苦瓜作为一种功能食品，具有降低血糖，抗病毒、抗肿瘤，增强机体免疫力等作用，被认为是新一代疗效高、副作用小的降血糖天然药物的典范［sup】［1］【/sup】。同时，更因为苦瓜含有一种降低血糖的多肽植物胰岛素，使人们对从中研制胰岛素的口服替代品充满了希望。目前，业已可通过有机酸、醇、丙酮沉淀、薄层层析、盐析、阳离子交换层析等传统或改良的实验室分离方法[sup][2-3]【/sup],从苦瓜中获得纯度较

6、高的植物胰岛素。然而，程序繁杂、实验技术要求高、应用样品量小，仍是这类方法难以实现大量纯化苦瓜中植物胰岛素的瓶颈。我们经过研究与改进，建立了通过盐析、阴离子交换层析、凝胶过滤等技术大量纯化苦瓜中植物胰岛素的程序化制备过程，并形成壳聚糖包封的口服制剂，进而为苦瓜中植物胰岛素广泛、有效的应用奠定基础。1材料和方法1.1材料新鲜苦瓜（市售）。A缓冲液：0.1M/LTise-HClpH7.0；B缓冲液:0.1M/LPBpH7.0（均为国药集团化学试剂沈阳有限公司提供）。1.2仪器DEAE-SepharoseFF（美国GE公司）；SephdexG75（美国GE公司）；FPLC（美国GE公司）；核酸蛋白

7、计算器（美国GE公司）；四氧嚨唳糖尿病大鼠（北京军科院动物研究所）；冷冻高速离心机（日本HITACHI公司）；血糖测定仪（国产）。1.3方法1.3.1苦瓜中植物胰岛素的纯化新鲜苦瓜500g去籽，-20°C冷冻8h以上，组织破碎仪粉碎，苦瓜粉末用lOOmLA缓冲液采用微波震荡15min溶解。溶解后12000r/min4°C离心20min,收集上清。取上清，测量体积，按最终浓度30%（0.176g/mL）加入硫酸