厌氧菌的培养方法要点ppt课件.ppt

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1、厌氧菌的培养方法1物理方法包括遮断空气法、煮沸法、真空法、空气置换法、气体喷射法或转管法等化学方法包括焦性没食子酸法、铁丝绒法、保险粉法等生物学方法包括与需氧菌共生好氧法、燕麦发芽法等混合法包括厌氧罐（袋）法、厌氧手套箱法或厌氧室法、空气置换铁丝绒法、空气置换钯粒法等。21液体培养基的厌氧培养法培养基煮沸：驱气后置流水中急速冷却添加还原剂：0.03～0.05％L-盐酸半胱氨酸0.01～0.02％硫乙醇钠0.5～1％葡萄糖0.1％抗坏血酸其它还原剂添加琼脂32固体培养基的厌氧培养法厌氧罐法简易厌氧罐和厌氧袋法钢丝绒法焦性没食子酸法抽气换气厌

2、氧培养法生物好氧厌氧培养法转管技术和气体喷射培养法厌氧手套箱法（又称厌氧室法）42.1Gas-pak法5原理气体发生袋：柠檬酸和碳酸氢钠＋H2OCO2硼氢化钠＋H2OH2触媒：钯粒H2O厌氧罐中的O2厌氧指示剂111116厌氧指示剂亚甲基兰指示剂卢卡斯固体厌氧指示剂布鲁氏指示剂7亚甲基兰指示剂6％葡萄糖水溶液20.1N氢氧化钠水溶液0.10.05％亚甲基兰水溶液0.2厌氧无色残存有氧气蓝色8卢卡斯固体厌氧指示剂2％硼砂溶液5毫升9％硫乙醇酸1毫升酚红溶液0.1～0.2毫升0.02％美兰溶液10毫升琼脂1％厌氧无色残存有氧气蓝色9布鲁氏指示

3、剂60％羟甲基氨基甲酯14％葡萄糖10.02％美蓝1厌氧无色残存有氧气蓝色10Gas-Pak法的使用操作程序平皿培养基装入平皿架中置厌氧罐内；打开内盖居中金属网袋，装入触媒钯粒；打开锡箔纸袋，取出厌氧指示剂片；剪开气体发生袋一角，注入10毫升水，迅速紧闭罐盖，置培养箱中培养。约经5～10分钟后，放入厌氧指示剂片。注：操作较复杂，需注入水作为触媒。112.2.1简易厌氧罐干燥器容内径（厘米）容器1容器2容器3容积（毫升）硼氢钠氯化钴0.2克柠檬酸0.6克15cm（约2150毫升）或和0.6克钯粒1.5克碳酸氢钠0.7克18cm（约3500毫

4、升）硼氢钠氯化钴0.33克柠檬酸1克或和1克钯粒2克碳酸氢钠1.15克122.2.2厌氧袋法(三菱瓦斯化学株式会社)聚碳酸酯（复合塑料膜）制厌氧袋产气袋：2.5L、3.5L、350ml；厌氧指示剂厌氧培养罐：2.5L、7L、15x30cm培养袋、立式培养袋；微需氧产气袋1314适合嗜二氧化碳菌培养适合厌氧菌的培养适合兼性厌氧菌的培养15培养容器系列产品1617MGC厌氧培养产品信息列表耗材类产品名称编号AnaeroPack（安宁包）厌氧产气袋C-1微需氧产气袋C-2CO2产气袋C-3Oxygen-Ind氧气指示剂C-22AnaeroPou

5、ch（安宁包）厌氧产气袋C-11相应培养容器编号2.5L密封盒C-317.0L密封盒C-32立式培养袋C-43通用15×30cm培养袋C-41备注：少量样品培养选用AnaeroPouch系列产品（2-4皿/次）；常规及大量培养选用AnaeroPack系列产品（10培养皿以上）。18厌氧培养气体变化曲线图AnaeroPack-Anaero吸收容器中的氧气，产生二氧化碳，30-60分钟内氧气被完全吸收，产生21%左右的二氧化碳。19微需氧培养气体变化曲线图AnaeroPack-MicroAero吸收容器中的氧气，产生二氧化碳，在一小时内氧气

6、浓度变为8-9%，二氧化碳浓度变为7-8%。201.新鲜指示剂为粉红色（无氧，左）和蓝色（有氧，右），重复使用后受环境影响，反应减弱，指示剂变为浅紫色（无氧，中左）和淡蓝色（有氧，中右）。2.厌氧培养2-3小时后指示剂颜色变化稳定。氧气指示剂颜色变化图解212.2.3保险粉的厌氧罐培养法二亚硫酸钠（Na2S2O4）碳酸氢钠无水硫酸钠不用触媒222.3钢丝绒法酸性硫酸铜溶液钢(铁)丝绒铜和铁的络合物O2厌氧指示剂23酸性硫酸铜溶液：将自来水1升加硫酸铜60g，吐温-8020ml，加热溶解后，又加入2N的硫酸90ml，最后加水至6升；方法：取

7、5～6g钢丝绒/L，于1～1.5升酸性硫酸铜溶液浸泡30～60s，钢丝绒变成红铜色，挤净液体置铝质或玻璃容器中，放入厌氧罐内。随后将厌氧指示剂放入，密封厌氧罐，1～4h后可达厌氧状态242.4焦性没食子酸法焦性末食子酸粉末，NaHCO3或NaOH溶液无菌玻片已接种细菌的平板倒扣在上面融化的白蜡封边252.5抽气换气厌氧培养法玻璃干燥罐混合气钢瓶:10％二氧化碳、10％的氢气、80％的氮气三通阀触媒:钯粒/浸泡钢丝绒/氯化钴厌氧指示剂261：厌氧培养罐2：混合气体（CO2：H2：N2=1：1：8）钢瓶3：压力表4：三通阀5：缓冲瓶6：真空泵

8、272.6生物好氧厌氧培养法疱肉培养基:牛肉渣0.5g牛肉浸液7ml液面上加盖3～4mm厚的融化凡士林，灭菌。生物好氧厌氧培养方法282.7转管技术和气体喷射培养法360℃钢瓶进气铜柱除氧气体