、医疗器械无菌和初始污染菌检验.ppt

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1、医疗器械无菌和初始污染菌检验国家食品药品监督管理局北京医疗器械质量监督检验中心用于检查要求无菌的医疗器械是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。无菌试验的目的：将医疗器械或其浸提液接种于培养基内，以检验供试品是否有细菌和真菌污染。什么是无菌检查法？医疗器械无菌检验标准GB/T14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学试验方法2010年版《中国药典》无菌检查法医疗器械无菌试验检查要点指南（2010版）无菌检验是无菌医疗器械产品生产控制

2、过程中的一项重要内容。其检验方法、检验结果判定及检验人员业务能力等因素直接影响产品的质量和安全。作为无菌医疗器械生产企业，其无菌检验工作应由本企业独立完成。并要求企业的检验人员能当场操作或口述无菌检验的过程。培养基:是人工配制的生物营养物质，即用人工的方法将多种物质按各种微生物生长繁殖的需要配成的一种混合营养物。微生物:必须用光学显微镜或电子显微镜才能观察到的微小生物。微生物具有一定的形态与结构,并能在适宜的环境中迅速地生长和繁殖,如细菌、病毒、真菌等。无菌：是指某一物体或某一环境中不含有活的微生物。凡能杀灭物体中所

3、有活的微生物的作用称为灭菌。细菌：为单细胞微生物,其细胞分化不完善，无完整细胞核及核膜、核仁，直径一般为1μm~10μm。真菌：为多细胞或单细胞微生物，其细胞分化完善，有细胞核和各种细胞器，故易在体外生长繁殖，直径一般为10μm~100μm。医疗器械无菌检验所需设备超净工作台医疗器械无菌检验所需设备恒温培养箱（至少2台）医疗器械无菌检验所需设备压力蒸汽灭菌器医疗器械无菌检验所需设备电热干燥箱医疗器械无菌检验所需设备集菌仪医疗器械无菌检验所需设备生物安全柜:（从试验安全性考虑，建议阳性对照试验使用生物安全柜）医疗器械无

4、菌检验所需设备电子天平医疗器械无菌检验所需设备光学显微镜医疗器械无菌检验所需设备过滤装置（无油真空泵、滤杯、滤头、滤瓶、微孔滤膜、夹子）无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。无菌检查人

5、员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。还应该具有高度的责任心和严谨细致的工作作风。环境及人员要求无菌检查法环境要求隔离系统无菌检查法环境要求无菌室在消毒处理完毕后，应检查空气中的菌落数。无菌检查法环境要求TSA琼脂平皿在30℃~35℃培养48h证明无菌取3只放无菌操作台或超净工作台平均位置打开上盖，暴露30min后盖好3只培养皿上生长的菌落数平均应不超过1个无菌试验过程中也应检查空气中的菌落数，方法要求同上无菌检查法试验前准备器具灭菌：与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸汽灭菌器内121℃30

6、min，或置电热干燥箱内160℃2h。培养基：可按药典中的处方制备培养基，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2℃~25℃，一般在3周内使用。无菌检查法试验前准备配制培养基所需器具:无菌检查法试验前准备常用器具与稀释液:无菌检查法试验前准备培养基:无菌检查法试验前准备硫乙醇酸盐流体培养基:在供试品接种前,培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则,须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟）迅速冷却,只限加热一次，并应防止被污染。其装量与容器高

7、度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。30℃~35℃培养14天。需氧菌生长厌氧菌生长无菌检查法试验前准备培养基:无菌检查法试验前准备改良马丁培养基：23℃~28℃培养14天无菌检查法试验前准备培养基:无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。无菌性检查每批培养基随机不少于5支（瓶），培养14天，应无菌生长。培养基的适用性检查灵敏度检查：菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并

8、采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。金黄色葡萄球菌（Staphylococcus  aureus)［CMCC（B）26 003］铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)［CMCC（B）10 104］枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis )［CMCC（B）63 501］生孢梭菌(Clostridiu