人结肠癌原位移植瘤裸小鼠模型的活体成像观察.pdf

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1、174实验动物与比较医学LaboratoryAnimalandComparativeMedicinedoi：10．39690．issn．1674-5817．2016．03．003人结肠癌原位移植瘤裸小鼠模型的活体成像观察赵永江，朱淼鑫，袁立新，孙磊。，耿沁。，李静，姚明。，闫明霞(1．上海市同仁医院影像介入科，上海200023；2．上海市肿瘤研究所，上海200032)[摘要]目的建立人结肠癌原位移植瘤裸小鼠模型，探讨小动物活体成像系统在结肠癌原位移植瘤模型中的应用。方法应用慢病毒转染的方法建立同时表达绿色荧光蛋白及荧光素酶(GF

2、P／Luc)的人结肠癌细胞HCT．116，分别采用组织块法及培养细胞法建立裸小鼠结肠癌原位移植瘤模型，通过小动物活体成像系统动态观察肿瘤在肠原位的生长及转移情况。结果成功建立了稳定表达GFP／Luc的人结肠癌细胞，并应用该细胞成功建立了结肠癌原位移植瘤动物模型。经连续7周动态观察表明，随着肿瘤移植时间的延长，腹部皮下触诊显示肿瘤逐渐增大，小动物活体成像显示荧光素表达面积和强度也逐渐增大。结论小动物活体成像系统能够客观评价结肠癌的原位生长及转移情况，为体内深部肿瘤的观察和研究提供了有效的参考依据。f关键词1人结肠癌；原位移植；活体

3、成像系统：慢病毒载体[中图分类号]Q95—33[文献标识码]A[文章编号]1674-5817(2016)03—0174—06目前，结肠癌原位移植瘤动物模型已被广泛1材料与方法应用于结肠癌的基础研究，它能够模拟临床患者肿瘤发展的全过程，为其诊断、治疗及机制研究等1．1人结肠癌细胞株提供有用的实验工具⋯。小动物活体成像技术具有人结肠癌细胞株HCT一116为人低分化腺癌，操作简单、所得结果直观、灵敏度高、能够精确购于美国模式培养物保藏中一ti,(AmericanTypeCulture定量等特点，在刚刚发展起来的几年时间内，已广泛Col

4、lection，ATCC)，由上海市肿瘤研究所用含体应用于生命科学、医学研究及药物开发等方面【。积分数10％胎牛血清的DMEM(Dulbeccomodified国内在活体成像技术方面的工作刚刚起步，目前在Eaglemedium)培养基按常规方法长期保存和传代。结肠癌原位移植模型的研究和应用方面报道较少。1．2实验动物本课题拟在建立结肠癌原位移植瘤模型的基础上进SPF级雄性BALB／c—nu／nu小鼠16只，6～8周一步应用小动物活体成像系统观察结肠癌细胞在体龄，体质量18～22g，由上海市肿瘤研究所提供内的生长和转移情况，旨在为

5、结肠癌原位移植瘤模[SCXK(沪)2012—0001]，实验操作及动物饲养严格型的进一步推广及应用提供简便而可靠的方法，为按照SPF级标准要求进行[SYXK(沪)2012．00011。体内深部肿瘤的观察和研究提供有效的参考依据。1．3试剂仪器真核表达质粒eGFP一2A—CBGr99由德国癌症研究中心GJHaemmerling教授惠赠，全长5929bp，女稿日期]2016—03．04属氨苄青霉素抗性选择系统，带有细菌的氨苄青霉[基金项目】上海市科学技术委员会“创新行动计划”项目素抗性基因Amp，在巨细胞病毒(CMV)启动了驱动(1

6、3140900502；13140902102)下可在真核细胞中表达，产物为GFP与荧光素酶[作者简介】赵永ZE(1965一)，男，主治医师。(1uciferase，Luc)。pWPXL质粒载体，pAX2包E—mail：czxtjzx@126．com[通讯作者]闰明霞，女，医学博士，副研究员，研究方向：实验病装质粒，pMDG2包膜质粒及Topl0感受态细菌均理学。E．mail：mingxiayan@126．tom由国家癌基因及相关基因重点实验室惠赠。荧光底实验动物与比较医学LaboratoryAnimalandComparativ

7、eMedicine175物购自GOLDBioTechnology公司。Matrigel购自在裸小鼠体内的表达，曝光时间为10min，定量美国BD公司；胎牛血清购自Biowest公司；胰蛋白分析各时间点的荧光值，连续观察7周。在动物酶购自Gibco公司：培养皿及培养板等购自Coming处于濒死状态时，处死荷瘤裸小鼠，行详细的解公司；庆大霉素购自上海中西制药有限公司；戊巴比剖学观察移植瘤生长情况，周围脏器受累情况，妥钠购自上海西唐生物科技有限公司；其他化学试剂腹腔内及腹膜后淋巴结转移情况，肝、肾、肺、均为进口分装或国产分析纯试剂。脾

8、等多个器官有无转移灶出现。小动物活体荧光成像系统购自德国Berthold1．6统计学处理TechnologiesGmbH&Co．KG，仪器型号为LB983将所有数据用SPSS11．5软件进行处理，计量NC320，分析软件为WinLight32，320万像素的冷资