医疗器械无菌检查SOP.doc

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1、医疗器械无菌检查SOP1、目的：制定本司所有产品无菌检查操作规程。2、范围：适用于本公司产品无菌检查。3、职责：检验员负责实施，质量部经理监督实施。4、内容4.1操作要求4.1.1与供试液接触的所有器具应采用可靠地灭菌方法，置压力蒸汽锅内121℃，30min。或置电热干燥箱内160℃，2h。4.1.2超净工作台应符合局部洁净度100单向流空气区域要求。无菌室在消毒处理完毕后，应检查空气中的菌落数，方法如下：取培养皿，无菌操作注入融化的培养基约20ml，在35℃培养48h证明无菌后取3支培养皿在超净工作台平

2、均位置上打开上盖，暴漏30min后置35℃培养48h后取出检查，3支培养皿上生长的菌落数平均不应超过一个。4.1.3无菌检查过程中应检查空气中的菌落数，方法同4.1.2.在试验开时打开培养皿盖，至试验结束后盖好置35℃，培养培养48h，结果应符合4.1.2要求。4.2培养基配制4.2.1硫乙醇酸盐流体培养基：称取硫乙醇酸盐流体培养基29.3g，加入蒸馏水或去离子水1L，搅拌加热至沸腾完全溶解，分装试管.121℃高压蒸汽灭菌15min。4.2.2改良马丁培养基:称取改良马丁培养基28.5g，加入蒸馏水或去离

3、子水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管，115℃，蒸汽灭菌30min。4.2.3营养琼脂培养基：称取营养琼脂培养基32.0g，加入蒸馏水或去离子水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角锥形瓶，121℃，高压灭菌15min。4.2.4营养肉汤培养基：称取营养肉汤培养基18.0g，加入蒸馏水或去离子水1L，搅拌加热至蒸汽灭菌15min，冷却至常温，备用。4.3培养基适用性检查4.3.1无菌性检查：每批培养基随即抽取不少于10支。5支置35℃，另5支置25℃培养14天，均应无菌生长。4.3.2灵敏度检查：培

4、养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代，（从菌种冷冻中心获取得的冷冻干燥菌种为第0代），试验菌应采用适宜的菌种保存技术进行保存，以保证菌株的生物学特性。金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）[CMCC(B)26003]铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)10104]枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）[CMCC(B)63501]生孢梭菌（Clostridiumsporogenes）[CMCC(B)64914]白色念珠菌（Cand

5、idaalbicans）[CMCC(F)98001]黑曲霉（Aspergillusniger）[CMCC(F)98003]4.3.3菌液制备：接种金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，枯草芽孢柑的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，35℃培养24小时，接种白色念珠的新鲜培物至改良马丁培养基中，25℃培养48小时。上述培养物用0.9%的氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬浮液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁培养基上，28℃培养5天，加入3~5ml无菌的含0

6、.05%聚山梨酯80的0.9%氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子悬浮液。菌液在室温下放置应在两小时内使用，若保存在2~8℃可在24小时内使用。黑曲霉的悬浮液可保存在2~8℃，在验证过的贮藏期内使用。4.3.4培养基接种：取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌，生孢梭菌各2支，另一只不接种，作为空白对照，置35℃培养3天；取每支装量为9ml的改良马丁培养基5支，分别接种小于100cfu的白色念珠，黑曲霉各两支，另

7、一支不接种作为空白对照，置25℃培养5天。逐日观察结果4.3.5结果判定：空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管菌生长良好，判定该培养基的灵敏度符合规定。4.4稀释液，缓冲液及其制备方法4.4.10.1%蛋白胨水溶液：取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调节PH至7.1±0.2，分装，灭菌。PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液：0.9%氯化钠缓冲液：取氯化钠9.0g加水溶解成1000ml，过滤，分装，灭菌。（仅用于上述两种溶液不适用时使用）4.5方法验证试验4.5.1菌种及菌液制备：同培养基灵敏

8、度检查。4.5.2直接接种法：取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基8管，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌，铜绿假单菌，枯草芽孢杆菌，生孢梭菌，各两管，取符合直接接种用量要求的改良马丁培养基4管，分别接入小于100cfu的白色念珠菌，黑曲霉各2管。其中一管接入每支培养基规定量的供试品量，另一管作为对照，细菌置35℃，真菌置25℃培养5天，逐日观察试验菌的生长情况。4.5.3结果判定：与对照管比较，如含供试