细胞培养的注意事项.doc

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1、相关疾病：每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了，培养细胞时有哪些惨痛经验教训可以分享呢?早走早脱身，从此专注黑生物1.严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干。　　2.不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。　　3.有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。　　4.水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换(灭菌水加进去)。　　5.晚上离开的时候最好给细胞房照紫外，超净台是用完就开。　　6.最好的是同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。　非科班出身经验分享　　1.别怕浪费。枪头什么的只

2、要有可能污染就换，如果用酒精灯就什么都稍微烤一下，别直接放到火上，离一段距离。　　2.动作要既轻柔又有力。动作太重会有一堆一堆的气泡，动作太轻就吹不下来...刚开始的时候吹细胞太痛苦了，稍微一下就起泡。后来就是吹的时候枪里的培养基不要一次全都压出来，留一点，枪的最头部尽量深的在液面以下。　　3.离开过操作台的东西再进操作台之前一定要用酒精喷一遍，包括一切实验耗材、仪器、以及你带着手套的手。　　4.实验结束后对实验台的消毒。紫外什么的，用前用后都照个30分钟。　　5.身体的各个部分尽量的少接触不需要接触的地方的地方。比如实验台，又比如培养箱内部。　　6.细胞的密度根据细胞的性质、传代的时

3、间以及自己的心情来定。培养基的话最多最多不要超过2天就要换一次。细胞可以不传代，但是培养基是一定要换的。　　大概就是，不该碰的地方不碰，有影响的地方少碰;该使劲的时候绝对不含糊，不该使劲的地方一定忍住。如果是比较简陋的操作台就一定要摆个酒精灯，所有操作紧密围绕在酒精灯周围进行。如果是高级台子就多用酒精喷喷。感觉生物的实验，心疼钱就还是不要做了。　　最后一点点绝对非科班的经验。癌细胞真是坚挺。有一次实在是不想传了，放了5天吧，感觉都长了几层出来，培养基都黄了。抱着试一试的心情传了一次，又坚强的活过来了。当然，状态肯定也差的很了。　换种心情，好好生活!　　养了三年细胞，各种肿瘤细胞，说一点

4、自己的看法：　　1.培养细胞前，可以看看细胞特点说明书，包括细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等。　　2.不同细胞生长周期不同，有的生长很快，比如说MDA-MB-231，传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了，有的又是特别慢，等的人心焦，BT474就是，传代是一分二，复苏起始的时候两周多才能长满，所以就要在培养细胞的过程中多多摸索了。　　3.对于娇弱的细胞，就得细心呵护了，胰酶消化不能过久，吹得时候要轻柔，离心时候也要注意转速和时间，每天都要去看一下细胞，肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。　　4.冻存细胞复苏后第二天最好更换一次培养基。　　5.培养箱隔一段时间彻底

5、用酒精棉擦洗一次。　　6.养细胞最大的教训：不能偷懒!　细胞虐我千百遍，我待细胞如初恋。　　1.不管买的细胞、惠赠的细胞，刚拿到手赶紧做两件事：检测是否有支原体污染;迅速扩增冻存。　　2.发现有污染迅速处理掉，特别是当你养了很多种细胞时;细菌污染，真菌污染很容易发现，支原体污染的话，细胞会长的慢，买个支原体检测的kit定期检测一下。　　3.细胞房日常的值日清洁是必须的，此外还要定期熏蒸。　　4.细胞的传代一定要规律，保持相同的confluency和传代时间间隔，不要随心所欲或者拖延。　　5.注意个人卫生。　靠内心感动细胞　　1.自己的细胞自己养，血的教训。　　2.在生物安全柜(或者超净

6、台)，枪头，血清管，血清，培养基，瓶子都足够好，并且细胞房有良好的卫生措施(比如隔离服，手套，口罩，清洁，HEPA等等)且不违法操作原则的情况下，你其实很难污染。　　3.上述条件不完备的情况下，就要多注意无菌操作了：比如要用的东西提前拿到台子里照啊(不过这个其实也不大好，因为会挡住紫外线)，使用前SDS+酒精擦台子，进出超净台一定要酒精擦手。　　4.少对细胞说话，多靠内心来感动它们(是的!心不诚是不可以的!)至少1天看1次。　养细胞很容易　　养细胞真的不难，最关键几点：　　1.所有的东西使用最好的，如果你用的血清、培养皿、培养基、胰酶什么的都是进口的，真的很难相信你会把细胞养坏。　　2

7、.动作要快，胰酶消化，换液什么，细胞暴露在空气中的时间越少越好。另外，要掌握好胰酶消化时间，所谓的细胞状态差，很多时候是传代的原因。　　3.有时间的话，需要细胞计数，传相应数目的细胞到培养皿中，可以大致清楚细胞的生长曲线，不会临时要处理，手足无措。　　4.要做什么心里要非常清楚，合理安排时间，细胞房的实验穿插进行，可以节省很多时间，也不会耽误别人的实验。　　5.个人的实验器具自己收一套，不要和别人混用，最近换了什么新的东西稍微记一下，试剂一旦怀