实验3浊度测定分光光度计的使用.ppt

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1、浊度的测定实验目的掌握分光光度计法掌握浊度计法的原理与操作技术仪器容量瓶比色管浊度计分光光度计试剂硫酸肼溶液：称取1.000g硫酸肼溶于水，定容至100ml六次甲基四胺溶液：称取10.000g六次甲基四胺溶于水，定容至100ml标准溶液：吸取5.00ml硫酸肼溶液和5.00ml六次甲基四胺溶液于100ml容量瓶总，混匀于25度反应24h，用水稀释至标线。无浊度水了解分光光度计的工作原理及操作技术原理光线的本质是电磁波的一种，有不同的波长。肉眼可见的彩色光称为可见光，波长范围在400～750nm：小于4

2、00nm的光线称为紫外光；大于750nm的光线称为红外光。当光线通过透明溶液介质时，其辐射的波长有一部分被吸收，一部分透过、因此光线射出溶液之后，部分光波减少，这种光波的吸收和透过可用于某些物质的定性定量分析。依据Lambert-Beer（朗伯－比尔）定律，一束单色光通过溶液后，光波被吸收一部分，其吸收多少与溶液中溶质的浓度和溶液厚度成正比。当入射光、吸收系数K和溶液的光径长度L不变时，吸光度A与溶液的浓度C成正比。具体测量时，补充知识测量后的计算方法使用７２１型可见分光光度计双缩脲法测定蛋白质浓度原

3、理双缩脲法是蛋白质光度分析法的一种，是利用蛋白质的双缩脲反应而测定蛋白质含量的方法。因蛋白质含有两个以上的肽键，所以有双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关。在一定的实验条件下，未知样品溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于540~560nm测定，即可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度。试剂一试剂1．标准酪蛋白溶液（5mg/ml）用0.05mol/LNaOH溶液配制：5g酪蛋白加0.05mol/LNaO

4、H溶液至1000ml。2．双缩脲试剂溶解1.5g硫酸铜（CuSO4·5H2O）和6.0g酒石酸钾钠（NaKC4H4O6·4H2O）于500ml蒸馏水中。在搅拌下加入10%NaOH溶液300ml，用蒸馏水稀释到1升，贮存在内壁涂有石蜡的瓶中，可长期保存。3．未知蛋白质溶液γ–球蛋白溶液。实验结果求出待测蛋白质溶液的光密度后，从标准曲线上查出其蛋白质浓度，按稀释倍数求出每毫升蛋白质溶液的蛋白质含量。蛋白质分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，使蛋白质具有吸收紫外光的性质。吸收高峰在280

5、nm处，其吸光度（即光密度值）与蛋白质含量成正比。此外，蛋白质溶液在238nm的光吸收值与肽键含量成正比。利用一定波长下，蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系，可以进行蛋白质含量的测定。紫外吸收法测蛋白质含量紫外分光光度计浊度计法1.定标用蒸馏水定出仪器的零点,再用此零点测量空气,得到参数值.称为定标值.以后在测量时,只要用调整旋钮将数字精确调到定标值方可直接测量.2.测量用待测液冲洗样槽注入待测液至液位线.擦干样槽外侧,将读书调到定标值,选好档位.将样槽放入样槽室,管束样槽门.此时显示屏上

6、的读数就是待测液的实际浊度.