临床生化检验—肾功能实验之尿酸尿素肌酐实验.ppt

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1、肾功能实验余琳临床生物化学检验-实验课程肾功能检测肾小球功能检测肾小球滤过功能检测如：内生肌酐清除率肌酐、尿素、尿酸、胱抑素C肾小球屏障功能检测如：尿液白蛋白、转铁蛋白、IgG肾小管功能检测肾小管排泌功能检测如：对氨基马尿酸、酚红排泄试验肾小管重吸收功能检测如：葡萄糖、尿酶、α1微球蛋白、β2微球蛋白理论回顾实验目的掌握：尿素、肌酐和尿酸的测定原理熟悉：操作过程和注意事项了解：临床意义实验安排尿酸：手工比色法检测尿素和肌酐：半自动生化分析仪检测实验内容实验1尿酸检测实验2尿素检测实验3肌酐检测实验一：尿酸测定（终点法）尿酸

2、酶尿囊素+CO2+H2O2尿酸4-AAP+TOOSPOD醌亚胺+H2O546nm波长处检测吸光度，颜色深浅与尿酸的浓度成正比。TOOS：N-乙基-N-（2-羟基-3-磺丙基）-3-甲基苯胺尿酸试剂准备R1（粉）：尿酸酶、POD、4-AAP、TOOSR2（液）：磷酸缓冲液R1+R2=R尿酸标准液（UA）：301μmol/LS：R=1:503ml体系操作步骤空白管标准管样品管蒸馏水60μl标准品60μl待测血清60μl工作液3ml3ml3ml混匀，37℃保温10min，以空白管校零后，在546nm波长下读取标准管及样本管吸光度

3、A标、A测。数据处理参考区间健康成年男性：208-428μmol/L健康成年女性：155-357μmol/LA标–C标A测C测=实验内容实验1尿酸检测实验2尿素检测实验3肌酐检测实验二：尿素测定（两点法）脲酶尿素+H2O2NH3+CO2GLDHNH3+α-酮戊二酸+NADH+H+谷氨酸+NAD++H2O340nm波长下吸光度下降的速率与尿素的量成正比尿素试剂准备R1（粉）：脲酶、谷氨酸脱氢酶（GLDH）、NADHR2（液）：缓冲液、α-酮戊二酸R1+R2=R尿素标准液（Urea）：7.1mmol/LS：R=1:100(1m

4、l体系)操作步骤空白管标准管待测管蒸馏水1ml标准品10μl待测血清10μl工作液1ml1mlUrea=BUN（BloodUreaNitrogen）操作步骤反应30秒和60秒两点检测吸光度，半自动检测波长=340nm参考区间：2.9-8.2mmol/L尿素检测注意事项1、先准备好试剂，一加样立即混匀并检测2、防止氨离子的污染3、血氨升高可使尿素测定结果偏高，两点速率法能较好地消除内源性氨的干扰4、用蒸馏水空白调零即可实验内容实验1尿酸检测实验2尿素检测实验3肌酐检测实验三：肌酐测定（两点法）505nm波长处检测吸光度，颜

5、色深浅与肌酐的量成正比肌酐+碱性苦味酸橘红色的苦味酸肌酐复合物Jaffe反应肌酐试剂准备R1（液）：氢氧化钠R2（液）：苦味酸R1+R2（1:1）=R肌酐标准液（CRE）：133μmol/LS:R=1:10（1ml体系）操作步骤反应20秒和60秒两点检测吸光度，在半自动中检测波长=505nm血肌酐浓度参考区间：男性44-133μmol/L女性70-106μmol/Lfastreactioncreatininereactionslowreaction0s20s60s80sAcetoaceticacidTP,Glu,VitC

6、操作步骤试剂空白管标准管待测管蒸馏水100μl标准品100μl待测血清100μl工作液1ml1ml1ml肌酐检测注意事项1、标本即加即检2、不宜使用全血标本，全血中假肌酐物质较多3、需进行试剂空白调零总结与思考归纳总结学过的利用过氧化物酶及脱氢酶指示系统检测的项目。评价今天实验所学的各检测项目：灵敏性、特异性、局限性。何为假肌酐？如何消除假肌酐的干扰？开机后主界面