改良LORRY法测蛋白质含量.ppt

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1、实验室规则实验要求实验室安全：实验服、口罩、手套试剂和仪器的使用禁止大声喧哗，保持实验环境的安静实验室卫生实验分组实验报告格式实验名称姓名：班级：学号：实验原理：实验目的：实验步骤：文字简洁，尽可能采用图表实验结果：原始数据、计算过程、结论实验讨论：结果分析、实验注意事项实验日期：同组人员：总分100：50%为实验理论（闭卷）50%为实验技能操作及平时平时（包括实验报告和平时表现）实验课的考核？？？实验安排12临床药理、医学检验、药学13护理班13生工、药贸实验四：谷丙转氨酶活性测定和竞争性抑制（22&7）实验五：质粒DNA的提取与电泳（27）实验一：改良Low

2、ry氏法测定蛋白质浓度（1）实验二：乙酸纤维素薄膜电泳和凝胶柱层析（14&13）实验三：血清甘油三酯含量测定（26）试验六：聚合酶链式反应（28）实验七：血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳（15）一、玻璃仪器的常规清洗（P2-3）实验基本操作清洗剂刷洗自来水冲洗（至少5遍）蒸馏水冲洗（2-3次）干燥与放置二、吸量管的使用（P3-4）选、吸、平、减、吹三、试剂瓶、吸量管、试管的放置试剂瓶用后放回原处、标签面向同一方向吸量管箭头朝下放置，以免倒流空置干净试管倒扣放在试管架上四、分光光度计的原理（P11）光源I0I单色器样品池狭缝检测系统T=I/I0，A=-lgT1、A1/A

3、2=c1/c22、标准曲线法Lambert-Beer定律A=KcL1.打开电源，调节旋钮至需要的波长，预热20~30min2.1档（空白管），T模式调100%，显示“Blank”、“100”3.拉杆拉至1.5档，T模式调0%，显示“0.00”4.切换到A模式，拉至2、3、4档，读取各个样品的吸光度5.使用完毕后，置于休息档（1.5档）拉杆，1-4档样品池读数波长五、分光光度计的使用1档，空白对照，A=0，T=100%1.5档，隔板，A=+∞，T=0%2档，样品1，A=？3档，样品3，A=？4档，样品4，A=？1、分清光面、毛面手只可接触毛面，光线须从光面通过2、

4、用溶液润洗2-3次，装至2/3至4/5体积3、粗纸吸水、柔纸擦亮光面4、从低到高依次测量，不需清洗比色杯5、蒸馏水冲洗3-5次，擦干，倒扣放置毛面光面六、比色皿的使用改良Lowry氏法测定蛋白质含量实验一P28实验目的1、学习改良Lowry氏法测定蛋白质含量的原理及方法2、了解标准曲线在物质定量测定中的应用及绘制要点实验原理凯氏定氮法16%紫外吸收280nm呈色反应Pr.Cu2+OH-Pr-Cu2+螯合物(紫红色)酚试剂钼蓝-钨蓝混合物(蓝色，深浅与蛋白含量呈正比)（双缩脲反应）Pr.Cu2+改良Lowry法费时较长，而且要精确控制操作时间。显色程度与时间有关。

5、专一性较差，干扰物质较多。灵敏度高双缩脲法的检出限为0.2~1.7mg/ml，而本法的检出限为0.015~0.110mg/ml。优点缺点实验步骤试剂（ml）蛋白标准品样品测定管012345Pr标准液00.10.20.40.60.8待测血清1.0生理盐水1.00.90.80.60.40.20试剂A0.9ml,混匀后，37℃水浴10min试剂B0.1ml,混匀后，室温放置10min试剂C3ml,立即混匀，37℃水浴10min1、标准曲线的绘制和实测样本浓度的求得实验结果0x1x2x3x4Y3OD650蛋白质量（mg）/蛋白浓度（mg/ml）Y2Y1样品吸光度样品浓度

6、2、浓度换算样品体积实测蛋白质量待测蛋白浓度（g/L）=实测蛋白浓度╳稀释倍数待测蛋白浓度（g/L）=╳稀释倍数注意终体积相同的前提下，可以用质量代表浓度例如：1号管中，蛋白质量为0.02mg，而其终浓度为0.004mg/ml注意溶液的稀释倍数例如：若以浓度为横坐标，根据吸光度得到实测蛋白浓度为0.02mg/ml,则待测蛋白浓度=0.02mg/mlx5x1000=100mg/ml若以质量为横坐标，根据吸光度得到实测蛋白质量为0.1mg,则待测蛋白浓度=(0.1mg/1ml)x1000=100mg/ml注意事项1、测定管蛋白浓度应在0.015-0.110mg/ml

7、；2、各管加试剂C必须快速，并立即摇匀，不应出现混浊；3、精确控制操作时间。Let'sbegin！