微生物的计数与活性污泥中生物相的观察.doc

《微生物的计数与活性污泥中生物相的观察.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、微生物的计数与活性污泥中生物相的观察实验原理利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计方法。此法的优点是直观、快速。此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。由于计数室的容积是一定的（0.1mm3）,出含有细菌的溶液滴在槽里时，通过水的表而张力扩散到计数室里，细菌也被分散到不同的格里，通过计算不同的格里的细菌数，最后就可以计算出，溶液里所含的细菌数量。活性污泥屮的生物札I比较好照样，以细菌和原生动物为主，还有真菌、后生动物等。在正常的成熟污泥屮，细菌大多集中于菌胶团絮绒体屮，游离细菌较少，此吋，污泥絮绒体可具有一定状、稠密

2、、扩光率强、沉强性能好。原生动物常作为污水净化指标；当固着型纤毛虫占优势时，-•般认为污水处理池运转失常；当后生动物轮虫等大量出现时，意味着污泥极度衰老。所以可以通过观察原生动物，來评价活性污泥的状况，而J1原生动物也较微生物要大，容易观察。二、实验器材活性污泥样品、菌种：浓缩酵母菌液仪器：显微镜、血球计数板、盖玻片三、实验步骤1.检查与清洗血球计数板：在正式计数之前，如果沾有杂质或菌体要用95%乙醇轻轻擦洗计数板的计数室，然后蒸倔水彻底清洗血球计数板，放在显微镜下观察，调整好显微镜找到计数板刻度，检查有没有损坏。2.加样：先将盖玻片放在计数室上

3、，用吸管滴一滴已稀释好的菌液于盖玻片边缘即是旁边的板槽里，让菌液自行渗入，多余的菌液用滤纸吸去；稍等片刻，待酵母细胞全部沉降到计数室底部，再进行计数。3.计数：先在低倍镜下找到计数板的大格位置，然后将其移到视野屮间，然后转到高倍镜，适当调节光亮度，不能太亮，也不能太喑，然后将计数室要计数的格子移到视野屮进行计数。可以先用手机拍下，在手机里进行点数，另一个人就可以继续移动计数板到另一计数区域，这样就可以更快、更轻松地完成计数。1.计数:本实验用的是25*16型的计数板，所以应该要选择左上，右上，左下，右下，屮间五个屮格计数，如果有菌体落在双线上时，

4、只计算一边，对应的另一边不算，对每个样品重复计数3次，取其平均值，按下列公式计算每毫升菌液屮所含酵母菌的细胞数。酵母菌的细胞数=80小格内酵母菌细胞数%400%10000x稀释倍数802.活性污泥的观察：将载玻片与盖玻片清洗干净，然后擦干。直接用吸管吸取少量的活性污泥，滴一•滴到载玻片屮央，然后轻轻将盖玻片盖下，削除气泡，多余的水用纸吸干，要尽量将污泥散开，形成薄薄的一层，这样才有利用观察。转到40倍的物镜，调整好亮度后即可以观察。四、实验结果原生动物的形态特征线虫轮虫红头飘体虫水雄虫酵母菌细胞数的测定计算次数各大格中细胞数大格中细胞总数稀释倍数

5、总细菌数（个/mL）左上右丄左下右下屮间第一次2934302628147201.47X108第二次2837302529146201.46X108第三次3036282730149201.49X108平均值2936292629149201.49X108钟虫聚缩虫独缩虫斜管虫五、思考题1.说明用血球计数板计数的误差主要来IH哪些方而？应如何尽量减少误差,力求准确？误差主要来自于：原溶液误差：稀释倍数：稀释的大致范围是每个屮格屮的细菌数10、50个是比较理想的情况！如果太多，细菌可能会重叠，相互之间有影响；浓度太低，则容易受到其他因素的干扰。仪器误差：计

6、数板是否清洁干燥，计数板、盖玻片、微量吸管及刻度吸管的规格应符合要求或经过校正，计数法最后的计数都是按照原定的板数据，再加上菌数来计算的，如果仪器本身出现问题而不准确会造成很大的误差。操作误差：在滴溶液吋操作不规范，溶液量滴得过多或过少都会对渗透的菌数造成影响的，个人经验所得滴两滴是最适合的，如果滴一滴则溶液太少了，连槽都还没填满，不容易扩散到计数室里。一定不能多加，否则计数室内溶液量肯定会超过计数所限制的0.lmn?,每个小格里都有可能出现上下层的细菌数，若出现部分细菌看不清，无论怎么调都总有一部分细菌看清，则证明所加的量已经超标了，出现了分层

7、，此吋应该清洗计数板，重新加液。2.试述血球计数板的计数原理。为什么用两种不同规格的计数板计数同•样品，结果是一样的？血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由—块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片屮有四条下凹的槽，构成三个平台。屮间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边丄面刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其屮只有屮间的一个大方格为计数室。这大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其容积为0.1mm3□在血球计数板上，一个大格分400个小格，每小格面积是1/400mm2o16X25型：大方格内分为16中格,每一

8、中格又分为25小格;25X16型：大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一•种构造，它们都有一个共同的特点，即