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1、常见疫病实验室检测方法最全常见疫病实验室检测方法目录常见疫病实验室检测方法1目录1常见ELISA操作方法2亚洲1型口蹄疫抗体液相阻断ELISA检测试剂盒2猪瘟抗原检测试剂盒5猪瘟病毒抗体阻断ELISA试验11猪瘟单抗酶联免疫吸附试验13口蹄疫结构蛋白检测方法（3ABC-I-ELISA）15口蹄疫抗体液相阻断-酶联免疫吸附试验17PRRS抗体间接酶联免疫吸附试验21犬细小病毒抗体酶免测定试剂盒说明书23犬瘟热病毒抗体酶免测定试剂盒说明书25常见PCR操作方法27猪伪狂犬病毒PCR诊断试剂剂盒27猪圆环病毒PCR诊断试剂盒30常见RT-PCR操作方法
2、33口蹄疫病毒分子检测诊断试剂盒33H5亚型禽流感病毒RT-PCR检测试剂盒说明书(20次)35新城疫病毒RT-PCR检测试剂盒37猪瘟病毒RT-PCR诊断试剂盒40凝集、血凝实验操作方法43弓形虫间接血凝试验(lHA)试剂使用说明书43伪狂犬病乳胶凝集试验试剂盒44猪细小病毒病乳胶凝集试验〈LAT〉诊断试剂盒使用说明书45猪传染性萎缩性鼻炎乳胶凝集试验〈LAT〉操作程序46猪瘟正向间接血凝试验试剂使用说明书及实验操作程序47口蹄疫正向间接血凝试验50高致病性禽流感血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验程序51琼脂扩散试验53鸡马立克氏病53禽流感琼
3、脂凝胶免疫扩散试验55荧光抗体检测57猪瘟荧光抗体试验操作程序57对狂犬病疑似动物脑组织的直接免疫荧光(dFA)检测58血清学诊断检测常用试剂配方60禽流感HA和HI试验用溶液的配制60补充实验63猪流感病毒H1亚型Hl试验抗原与阴、阳性血清说明书6377常见疫病实验室检测方法猪流感病毒RT-PCR检测66猪瘟病毒RT-PCR诊断试剂盒猪繁殖与呼吸综合症（Nsp21594~1680变异株）RT-PCR检测实验68一、布鲁氏菌病试管凝集试验抗原与阴、阳性血清71二、布鲁氏菌病虎红平板凝集试验72动物结核病诊断操作规程7377常见疫病实验室检测方法常
4、见ELISA操作方法亚洲1型口蹄疫抗体液相阻断ELISA检测试剂盒一试剂盒内含物.说明书亚洲1型口蹄疫阳性对照血清(己稀释浓度为1:8).96孔ELISA板亚洲1型口蹄疫阴性对照血清.液体稀释槽3%双氧水.U型96孔抗原抗体反应板25×PBST洗涤液(稀释时准确量取).封板膜豚鼠抗血清稀释液.灭活亚洲Ⅰ型口蹄疾病毒抗原(用冰决包裹)终止液.亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒兔抗血清包被缓冲液(碳酸盐)胶囊.亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒豚鼠抗血清底物(柠檬酸-磷酸盐)缓冲液片剂.兔抗豚鼠血清IgG-辣根过氧化物酶结合物OPD片剂二器材准备(需用户自备)1.移液器:5-50µ
5、l移液器、0.2—10µl移液器、50—200µl移液器、50—300µl12道移液器各一把。2.移液枪尖(若干)。3.抗原抗体反应板:微量血凝板(U型、V型均可)5块,本试剂盒配备两块,用于被检血清的稀释和抗原抗体反应。注:抗原抗体反应板可重复使用,实验后,用水冲洗干净,然后用无离子水沸水浴30秒,晾干,待用。4.超纯水,无离子水或蒸馏水。三、试剂准备(需用户完成)1.包被缓冲液(PH9.6)将本试剂盒配备的碳酸盐缓冲液胶囊1粒小心打开,将胶囊内粉末倒入100ml无离子水中溶解即可。4℃存放,1月内有效。2.洗涤液(PBST)将本试剂盒配备的2
6、5倍浓缩PBST液(可能有结晶形成,用时微热溶化)用无离子水或蒸馏水做1:25稀释。(如果PH降低,务必用NaOH调至7.4)3.底物溶液取1片柠檬酸—磷酸盐片剂(本试剂盒配备)溶于100mL无离子水中,溶化后,取50mL溶液,再加1片邻苯二胺(OPD)片剂,充分溶解,分装（5mL/瓶或10Ml∕瓶),避光之-2O℃保存。用前避光溶化,临时每1mL上述溶液加10µL本试剂盒配备的3%的双氧水(H202)。务必加双氧水!四、操作步骤1.用包被缓冲液稀释亚洲1型口蹄疫病毒兔抗血清至工作浓度(1:1000),在ELISA板上每孔加50µl,振荡,封板或
7、置湿盒内，室温过夜。77常见疫病实验室检测方法2.抗原抗体(阴阳性对照血清及待检血清)反应根据不同的需要,选择图1-2中的一种布局在抗原抗体反应板上操作。图196孔酶标板检测10份样品布局图S11:8S2S3S4S5S6S7S8S9S10+1:32-1:41:161：641:81:321：1281:641：2561:1281：5121:2561:10241:5121:20481:l0241:4096图1为抗体滴度测定(定量)检测10份样品布局图;图2为抗体滴度测定(定量)检测20份样品布局图。图296孔酶标板检测20份样品布局图S11:32S2S
8、3S4S5S6S7S8S9S10+1:32-1:41:641:641:81:1281:1281:2561:256S111:32S12S1
