植物细胞程序性死亡(PCD)的诱导、形态观察.doc

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1、首都师范大学生物实验报告科目：细胞生物学班级：师范班姓名：王舉学号：口10800065实验名称：植物细胞程序性死亡(PCD)的诱导、形态观察日期：10.30一、实验目的：1、了解植物细胞PCD的概念2、掌握植物细胞PCD的诱导方法、和统计方法3、了解动物细胞凋亡过稈的方法二、实验原理：1＞细胞死亡：细胞死亡作为生物体的一种常见现象，在动物细胞屮有三种方式：凋亡(apoptosis),自噬(autophagy)和坏死(necrosis)。前两种类型属于细胞程序性死亡(programmedcelldeath,PCD)0细胞坏死是细胞在遭受极度刺激时引起的细胞死亡,以细胞质膜

2、的破裂为特征，造成内含物的炎性泄賂是一种非正常死亡。细胞的PCD是细胞的一种“主动性〃死亡行为，从形态上和功能上都与细胞坏死有很大的不同。2、植物中细胞程序性死亡(PCD)：目前可依据液泡膜破裂后，是否在细胞质屮发生快速降解将PCD分为两个大类。第一类为白溶性(autolytic)PCD,与液泡屮的水解酶的释放有关，在液泡破裂后，导致细胞质的快速清除。第二种为非H溶PCD,(non-autolytic),即液泡膜破裂但是没有出现快速的细胞质的清除。H前鉴定细胞的PCD类熨，还是以细胞形态学为主。3、动植物细胞凋亡标准：动物：凋亡:凋亡小体，或者在细胞表面的水泡，感染病原

3、体后在其他细胞屮的降解。B噬：H噬小体，白溶酶体，和小的促进细胞溶解的液泡数目的增加坏死：没有上面的定义的标准。植物：白溶：植物膜破裂Z后对细胞质的快速清理。非自溶：没有对细胞质的快速清理。其他：染色质浓缩细胞核破裂白我标记信号白食信号细胞膨胀，细胞器膨胀，质膜破裂染色质浓缩。液泡体积增加(细胞质体积减小)需要Ca2+的内流，细胞质皱缩，细胞器膨胀，小泡增多但体积不增加。三、实验步骤1、植物细胞凋亡：加入较高浓度的CaCL2诱导，观察和统计诱发产生的PCD细胞。川改良苯酚品红染色观察PCD细胞核发生染色质凝集(condensation)＞趋边化(margination)

4、、产生PCD小泡等形态学上的变化。（1）形态观察：洋葱内表皮,100mmol/LCaCI2500mmol/LCaCI2（注意都用PBS（6.5）配置)处理两小时，用于形态观察和凋亡统计。(2)PCD计数2、动物细胞凋亡观察：观看录像。四、实验材料洋葱鳞茎内表皮、细胞PCD诱导剂一一Ca2+、形态学观察染色液一一改良苯酚品红五、实验结果1、植物细胞凋亡观察:(1)观察数据:处理计数PCD率(平均)数据0.1MCaCI2（2hr）47/116（如图A）46/115（如图B）108/26（如图C）30/120（如图D）23/93（如图E）31%PCD率41%40%24%25%

5、25%0.5MCaCI2（2hr）23/63（如图F）39/86（如图G）30/73（如图H）23/67（如图1）37/89（如图J）39.6%PCD率36%45%41%34%42%Ck20/97（如图K）20.6%(2)观察图片:A：0.1MCaCI2诱导2h的PCD观察（10*40）B：0.1MCaCI2诱导2h的PCD观察（10*40）C：0.1MCaCI2诱导2h的PCD观察（10*40）D：0.1MCaCI2诱导2h的PCD观察（10*40）(Ot7*OT)送曲QDd刖uiuJOE-OZ音镇ZlOe?IAI90:f(OV*OT)塗血QDd切uiujoe-OZ合

6、婆ZDe?IAISO:l(OV*OT)(OV*OT)修睢QDd「刃uiojos-OZ昔按ZIDBDIAIS*O:H滾睢QDd5IJuiinos-0Z昔按乙D9IAISO:9(OV*OT)滋睢QDd5IJuiiuo£-OZ合镇ZDBDIAIF0T(OV*OT)溺礎QDdGIJMZ昔镇ZIDBDIAI170:3K：对照组,光镜10X40(1)观察总结：<1>经过观察,洋葱内皮细胞都有一定数量的凋亡。没有经过氯化钙的细胞PCD率彊低，其次为低浓度氯化钙处理后的洋葱细胞，PCD率最高的为是经过高浓度氯化钙处理后的洋葱细胞。可见化学胁迫因子氯化钙的浓度越高，対细胞凋亡影响越大。<

7、2>凋亡的细胞形态也各有不同，有的为细胞核变形，有的为质壁分离现象明显，有的为细胞膜皱缩，细胞质浓缩，细胞核呈新刀形，有的为染色质浓缩聚集，凝聚的染色质与细胞质成分包裹在一起，形成较多的近球状凋亡小体。2、动物细胞凋亡观察：(看录像)(1)细胞色索C作为一种信号物质，在细胞凋亡中发挥着巫要的作用。正常情况下，它存在于线粒体内膜和外膜之间的腔中，凋亡信号刺激使其从线粒体释放至细胞液,线粒体里的细胞色索c通过荧光标记，被染成黄绿色。(2)磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期,PS可