trizol LS 试剂使用中文说明书.doc

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1、TRIzolLS试剂(ambion)（中文说明书）货号规格室温贮存10296-010100ml10296-028200ml产品描述TRIzolLS试剂适用于液体样品，如人、动植物、酵母、细菌或者病毒来源的液体样品，提取高质量的总RNA（DNA和蛋白质也可以）全过程只需1小时。TRIzolLS试剂里含有酚、异硫氰酸胍和其它成分，由于在摇匀样品过程中能很有效地抑制RNase活性，所以TRIzolLS试剂能维持RNA完整性。TRIzolLS试剂允许同时处理大量的样品。TRIzolLS试剂能从一个样品里有序分离提取RNA、DNA和

2、蛋白质。TRIzolLS试剂均质化样品后，加入氯仿，能看见分层现象，上层是透明的含RNA的水相，中间层，下层是红色的有机相（含有DNA和蛋白质）。水相RNA用异丙醇能沉淀分离；中间层或者下层中的DNA用乙醇沉淀分离；异丙醇沉淀能使蛋白质从酚-醇相的上清液中沉淀出来。沉淀出的RNA、DNA和蛋白质洗脱杂质，重悬后用于下游。分离的RNA可以用于RT-PCR,NorthernBlotanalysis,DotBlothybridization,poly(A)+selection,invitrotranslation,RNasepr

3、otectionassay,andmolecularcloning分离的DNA可以用于PCR,andRestrictionEnzymedigestion,andSouthernBlots.分离的蛋白质可以用于WesternBlots,recoveryofsomeenzymaticactivity,andsomeimmunoprecipitation.注意：TRIzolLS试剂适用于液体样品（如，血液和病毒制品）。TRIzolLS试剂与TRIzol试剂仅在它们成分的含量上不同，TRIzolLS试剂的浓度更高，因此相对于同个样

4、品时，TRIzolLS试剂需要量更少。不要将未稀释的TRIzolLS试剂用于固体样品。处理固体样品时，TRIzolLS试剂没有TRIzol试剂效果好，收率要低些。警告TRIzolLS试剂含有的成分具有毒、腐蚀性和刺激性，如果处理不慎会有危害健康。请在通风橱里操作，并穿好实验服、戴好手套和安全眼镜。避免直接接触TRIzolLS试剂，会导致皮肤、眼睛或者呼吸道等暴露部位的化学灼伤。如果万一接触了皮肤或者眼睛，请立即用大量水冲洗15min，必要时去医院护理。如果吸入了气体，立刻到通风地方呼吸新鲜空气，必要时去医院护理。内容和贮存

5、TRIzolLS试剂有100ml和200ml两种规格的，室温运输和贮存。妥善保管，1年内性质都很稳定。使用目的仅用于研究，不能用于人或动物的诊断或治疗。需要材料分离RNA、DNA和蛋白质还需要下列材料，但是我们未提供分离RNA时，需要：氯仿；异丙醇；75%乙醇（DEPC水处理过）；无RNase水或者0.5%SDS；能达到12,000*g的高速离心机；聚丙烯微量离心管；水浴槽（55-60℃）。分离DNA时，需要：氯仿；100%乙醇；75%乙醇；0.1M柠檬酸钠（10%乙醇）；8mMNaOH；能达到12,000*g的高速离心机

6、；聚丙烯微量离心管。分离蛋白质时，需要：氯仿；异丙醇；100%乙醇；0.3M盐酸胍（95%乙醇）；1%SDS；能达到12,000*g的高速离心机；聚丙烯微量离心管。样品准备样品均质化1.确定样品类型，在室温下如下表操作。TRIzolLS试剂与样品的体积比为3:1，一定要按指定的量加入TRIzolLS试剂，否则提取RNA会有DNA污染。注意：当样品少量（<106细胞或者<10mg组织）或者样品体积<0.25mL，为方便提取RNA，需用无RNase水调整样品体积到0.25ml。样品类型为生物液体时，操作步骤：1.每0.25ml

7、样品加入0.75mlTRIzolLS试剂；2.移液器上下吹匀几次，使样品均匀。注意：污染物质含量高的生物液体（如，全血）应该先用无RNase水按1:1稀释。样品类型为组织时，操作步骤：1.每50-100mg组织样品或者0.25ml组织悬液加入0.75mlTRIzolLS试剂；2.高速搅拌器混匀样品。注意：采集样品后要立即处理和冷冻组织样品，不能处理未稀释的固体样品。样品类型为单层贴壁细胞时，操作步骤：1.吸出培养皿中的培养液；2.每10cm2表面积的培养皿加入0.3-0.4mlTRIzolLS试剂,直接加到培养皿里细胞上；

8、3.移液器上下吹匀几次，在培养皿里直接裂解细胞。注意：不要在培养皿中加水混匀，粘附在皿上的残留培养液足够了。样品类型为悬浮细胞时，操作步骤：1.离心去除培养液获得细胞；2.每0.25ml样品（来自动植物或者酵母细胞5-10*106，或者细菌细胞1*107）加入0.75mlTRIzolLS试剂；注意：加入