凝聚胺法交叉配血标准操作规程.doc

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1、凝聚胺法交叉配血标准操作规程1.原理 凝聚胺（polymatching）法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，促进血清（浆）中的抗体与红细胞相应抗原结合，再加入带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液，中和红细胞表面的负电荷，缩短细胞间距，形成可逆的非特异性聚集，并使IgG型抗体直接凝集红细胞。加入中和液后，仅由凝聚胺引起的非特异性聚集，会因电荷中和而分散，而由抗体介导的特异性凝集则不会分散。 　　2.标本采集： 　　2.1标本种类：抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清，将细胞配成5％盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清(浆)和红细胞悬液。 　　2.2标本要求：

2、抗凝和干燥管均可，如用抗凝血主张用EDTAK2（mg/dz）抗凝标本应无溶血，切标签齐全。 　　3.标本储存：急诊标本30分钟内完成操作，标本应至4℃冰箱保存7天。 　　4.标本运输：室温运输。 　　5.标本拒收标准：细菌污染。溶血标本，标签不齐全不能作测定。 　　6.试剂： 　　6.1试剂名称：凝聚胺试剂(polymatching) 　　6.2试剂生产厂家：(台资)珠海贝索生物技术有限公司。 　　6.3试剂组成： 试剂1.低离子介质(LowLonicMedium，LIM).试剂打开使用后，可置室温贮存，未开封者2-10度贮存，有效期为2年。 试剂2.凝聚胺溶液(PolybreneSolu

3、tion).贮存及有效期同上。 试剂3.重悬液(ResuspendingSolution).贮存及有效期同上。 试剂4.8.5％生理盐水。 　　7.仪器： 　　7.1血型血清索离心机：XTL-4.7上海离心机械研究所 　　7.2离心机：上海手术器械厂 　　7.3电热恒温水箱：北京长源实验设备厂 　　7.4显微镜：OLYMPUS(日本) 　　8.操作步骤及结果判断： 　　8.1供受者红细胞用生理盐水配成3-5％的细胞悬液。加样量均为：血清2滴，红细胞悬液1滴。主管：受血者血清+供者红细胞悬液;次管：受者红细胞悬液+供者血清;(阴阳对照管另设)。 　　8.2各管分别加低离子介质0.6ml混匀置

4、室温1分钟。加凝聚胺溶液2滴，混匀，置室温15秒。 　　8.31000g(3000rpm)，离心18秒，弃上清液，管底保留约2滴液体。轻摇 试管，观察是否形成凝块。如未形成凝块，则重做前面试验。 　　8.4加入2滴重悬液，轻轻混合，肉眼或显微镜下观察结果。 　　8.5凝块在1分钟内分散，试验结果为阴性，供受者血液配合;反之，如依照为不同强度的凝块，试验结果判为阳性，供受者血液不配合。实验结果必须在3分钟内判读。 　　9.操作性能：快速简便，特异性强，灵敏度较高，重复性好。 　　10.超出范围结果处理： 　　10.1细胞自凝：在冬天气温较低时，某些病人血清中含有冷凝集素而导致交叉配血假阳性;

5、遇此现象可用37℃-40℃生理盐水洗涤红细胞并置37℃水溶中轻轻摇动，观察结果。 　　10.2若病人血清(血浆)含有肝素，如洗肾患者能影响配血，须多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。 　　10.3红细胞悬液为5％为宜，过浓或过淡可使抗原抗体比例不适当，反应不明显易误判。 　　10.4各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集，部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。 　　11.方法局限性： 　　11.1试管，滴管吸头和玻片必须清洁干燥，防止溶血。 　　11.2操作方法应按规定，先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。 　　11.3离心时间不宜过长或过短，速度不宜过

6、快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。 　　11.4观察时应注意红细胞呈特异性凝集，继发性凝固及线状排列的区别