电镜练习题及参考答案.doc

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1、.一、电镜练习题及答案一、透射电镜标本取材的基本要求并简要说明。答：取材的基本要求如下：组织从生物活体取下以后，如果不立即进行及时固定处理，就有可能出现缺血缺氧后的细胞超微结构的改变，如细胞出现细胞器变性或溶解等现象，这些都可造成电镜观察中的人为假象，直接影响观察结果分析，甚至导致实验失败。此外，由于处理不当造成组织微生物污染，导致细胞的超微结构结构遭受破坏。因此，为了使细胞结构尽可能保持生前状态，取材成败是关键，取材成功的关键在于操作者必须要注意把握“快、小、冷、准”四个取材要点。(1)．快：就是指取

2、材动作要迅速，组织从活体取下后应在最短时间(争取在1～2分钟之内)投入前固定液。对于实验动物，最好在断血流、断气之前就进行取材，以免缺血缺氧后使细胞代谢发生改变而破坏细胞的超微结构。当然，最好是采用灌注固定法。为了使前固定的效果更佳，组织块要充分和固定液混合，应采用振荡固定10分钟以上，有条件的可采用微波固定法固定。(2)．小：由于常用的固定剂渗透能力较弱，组织块如果太大，块的内部将不能得到良好的固定。因此所取组织的体积要小，一般不超过1mm3。为便于定向包埋，可将组织修成大小约1mm×1mm×2mm长

3、条形。(3)．冷：为了防止酶对自身细胞的酶解作用，取材操作最好在低温(5℃～15℃)环境下进行，这样可以降低酶的活性，防止细胞自溶。所采用的固定剂以及取材器械要预先在冰箱(5℃）中存放一段时间。(4)．准：就是取材部位要准确，这就要求取材者对所取的组织解剖部位要熟悉，必须取到与实验要求相关的部位，不同实验组别间要取相同部位，如需要定向包埋的标本，则要作好定向取材工作。此外，还要求操作动作轻柔，熟练，尽量避免牵拉、挫伤与挤压对组织造成的人为损伤。二、什么是瑞利准则？电镜与光镜在原理上有何相似和不同之处？答

4、：1、光线通过二个比较靠近的小孔时，这二个小孔的衍射图会重叠在一起。当一个衍射图的中央亮斑正好落在另一个衍射图的第一暗环中心时，这二个点刚可以分辩。这就是显微镜分辩本领的瑞利准则。2、相似点：光学显微镜是利用玻璃制作的透镜对光进行折射，将一物点发出不同角度的光线最终会聚成一个像点。电子显微镜是以电子束作为光源，利用电磁透镜产生的电场或磁场折射电子束，并通过电子束轰击荧光屏激发荧光而达到成像目的。不同点：光镜的照明源是可见光，而电镜是用电子束照明。光镜的透镜用玻璃制成，而电镜的透镜是轴对称的电场或磁场。三

5、、简述透射电镜及扫描电镜样品制作流程答：1、透射电镜样品制作流程为取材——漂洗（生理盐水）——前固定（2.5%戊二醛，4ºC冰箱2小时以上）——漂洗（0.1M磷酸缓冲液，3次，45分钟）范文..——后固定(1%锇酸1小时左右)——漂洗（0.1M磷酸缓冲液，3次，45分钟）——块染（1%醋酸铀2小时）——梯度脱水（50%、70%、80%、90%丙酮各15分钟，100%丙酮2次，各10分钟）——浸透（丙酮：包埋液=1：1，37ºC烘箱2小时；丙酮：包埋液=1：4，37ºC烘箱过夜；纯包埋液45ºC烘箱2小时

6、）——包埋聚合（45ºC烘箱3小时，65ºC烘箱48小时）。2、扫描电镜样品制作流程为取材（做好样品观察面的标志）——漂洗（生理盐水或缓冲液）——固定（2.5%戊二醛2小时以上）——漂洗（0.1M磷酸缓冲液，3次，45分钟）——后固定（1%锇酸，2小时）——脱水（50%、70%、80%、90%、95%各15分钟，换醋酸异戊酯15分钟或叔丁醇15分钟）——干燥（零界点干燥或冷冻干燥）——镀膜（真空镀膜仪或离子溅射仪）四、常用的化学固定方法有哪些？答;常用的化学固定方法有1、浸泡固定法（也称组织块固定）：就

7、是将组织块直接浸泡入固定液当中进行固定。2、游离细胞固定法：适用于培养细胞、周围血、骨髓、胸腹水或其他渗出液。如为贴壁生长的培养细胞，应先用橡皮刮子将细胞从培养管壁上轻轻刮下，或用酶消化，使细胞脱离管壁。3、原位固定法：就是在组织未取下之前，在组织器官原来的位置进行预固定的方法。原位固定可分为点滴固定法和注射固定法两种。点滴固定法：就是将实验动物麻醉后暴露出所需的器官表面，小心地剥开包膜，将预冷的固定液直接滴在组织的表面上，并保持固定液适当浓度不使挥发干燥。注射固定法：就是将实验动物麻醉后，将固定液用细

8、注射针直接注射到所需固定的组织中或空腔脏器的内部。4、灌注固定法就是利用血液循环的途径将固定液灌注到所需固定的组织中，其特点是灌注快速、均匀，缺点是固定操作复杂、要求高。灌注固定法可分为全身固定和局部固定两种。通常采用的固定剂为2%～4%戊二醛溶液或者4%多聚甲醛溶液。五、普通透射电镜包括那些结构？请简要叙述。答：透射式电子显微镜（简称透射电镜）由四部分组成，即电子光学系统（即镜筒）、真空排气系统、电源系统和水冷系统。电子光学系统包括：照明