CORMs对X射线辐照后斑马鱼胚胎发育的影响.pdf

《CORMs对X射线辐照后斑马鱼胚胎发育的影响.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、CORMs对X射线辐照后斑马鱼胚胎发育的影响中文摘要目的：采用斑马鱼动物模型研究一氧化碳释放分子（CORM-3）对X射线辐照后斑马鱼胚胎发育的作用，并初步探讨CORM-3的作用机制。材料和方法：用不同浓度的CORM-3溶液(0、6.25、12.5、25、50、100、200、400μmol/L)处理受精后4h（4hpf）的发育正常的斑马鱼胚胎并培养至144hpf，分别在不同的时间点观察并记录CORM-3对斑马鱼胚胎的死亡率、孵化率、畸形、胎动、心率、体长及其游泳行为等发育的影响。用10μmol/L的CORM-3预处理发育正常的4hpf胚胎1h后给予4G

2、yX射线照射，观察CORM-3对X射线辐照后斑马鱼的死亡率、孵化率、畸形率、胎动及游泳行为等发育的影响；采用DCFH-DA荧光探针、SOD试剂盒分别检测24hpf胚胎体内的活性氧水平及SOD活性；采用吖啶橙（AO）染色，流式细胞分析（FCM）检测24hpf斑马鱼胚胎体内凋亡细胞；采用实时荧光定量分析（RT-PCR）检测斑马鱼胚胎凋亡相关基因表达以及蛋白免疫印迹（WB）检测斑马鱼胚胎体内蛋白表达水平。结果：（1）CORM-3对斑马鱼胚胎发育的影响：随着CORM-3浓度的增加，斑马鱼胚胎的死亡率逐渐增加，胎动、心率、体长逐渐降低；浓度为50μmol/L的C

3、ORM-3处理组开始可明显抑制胚胎孵化，致使胚胎孵化率降低（P＜0.05）；CORM-3浓度高于100μmol/L可导致斑马鱼幼鱼形态畸形，主要为心包水肿及卵黄囊水肿。在可见光实验中，CORM-3处理组的幼鱼游泳总距离随着浓度的增加逐渐降低，200和400μmol/L处理组幼鱼运动迟缓（P＜0.05）。（2）CORM-3对X射线辐照后斑马鱼胚胎发育的影响：X射线辐照可导致斑马鱼胚胎的死亡率及畸形率的增加，孵化率、胎动及游泳总距离降低（P＜0.05）；CORM-3预处理可降低X射线对斑马鱼胚胎发育的影响，表现为死亡率及畸形率低于X射线辐照组，孵化率、胎动

4、及游泳总距离高于X射线辐照组（P＜0.05）。（3）CORM-3对X射线辐照后的斑马鱼胚胎体内活性氧水平以及SOD活性的影响：24hpf时，X射线辐照组斑马鱼胚胎体内活性氧水平明显升高，SODI活性显著降低（P＜0.001）；CORM-3预处理进升高SOD活性，降低ROS水平（P＜0.001），缓解X射线诱导产生的斑马鱼胚胎体内活性氧的蓄积。（4）CORM-3对X射线照射后的斑马鱼胚胎凋亡、凋亡相关基因以及蛋白水平的影响：AO染色及流式细胞分析显示X射线辐照组斑马鱼胚胎的早期凋亡细胞较对照组多，CORM-3预处理可降低X射线引起的细胞凋亡；RT-PCR

5、显示X射线辐照组的促凋亡基因Bax、Caspase9、Caspase3的表达量高于对照组（P＜0.05），抗凋亡基因Bcl2的表达量低于对照组；CORM-3预处理可改善X射线对胚胎损伤导致的凋亡相关基因的表达，下调Bax、Caspase9、Caspase3的表达，上调抗凋亡相关基因Bcl2的表达；Westernblot结果显示CORM-3预处理可缓解X射线对斑马鱼胚胎导致的DNA损伤，γ-H2AX，P53蛋白表达量下降，Bcl2表达量升高。结论：1）CORM-3≥50μmol/L时对斑马鱼发育具有毒性作用；10μmol/L的CORM-3对X射线辐照后的

6、斑马鱼的发育具有潜在的保护作用。2)10μmol/L的CORM-3促进SOD活性水平升高，降低胚胎体内的活性氧水平，通过抗氧化应激反应来保护X射线对斑马鱼胚胎的辐射损伤。3）10μmol/L的CORM-3通过调节凋亡相关基因的表达发挥抗凋亡作用以及促进DNA损伤的修复来保护X射线对斑马鱼胚胎的辐射损伤。关键词：一氧化碳释放分子，斑马鱼胚胎，发育毒性，X射线IIEffectsofcarbonmonoxidereleasingmoleculesonthedevelopmentofZebrafishembryosirradiatedbyX-rayAbstra

7、ctObjective:Toinvestigatethedevelopmentaleffectsandpossiblemechanismsofcarbonmonoxidereleasemolecules(CORM-3)onzebrafishembryosirradiatedbyX-ray.MaterialsandMethods:The4hourspostfertilization(4hpf)zebrafishembryosthatdevelopednormallywereexposedtodifferentconcentrationsofCORM-3s

8、olution(0,6.25,12.5,25,50,100,200and400µmol/l)a