纸层析法实验.ppt

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1、氨基酸的分类鉴定纸层析法一、实验目的通过氨基酸的分离，学习纸层析的基本原理及操作方法。二、实验原理纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。层析溶剂由有机溶剂和水组成。物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移）来表示的：在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统；层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。三、实验器材1、层析缸2、毛细管3、喷雾器4、培养皿5、层析滤纸四、实验试剂1、扩展剂：是4份水饱和的正丁醇和一份醋酸的混合物。将20ml正丁醇15ml水放入分液漏斗中混匀，充分振荡，静置后分层，放出下层水层，再和

2、5ml冰醋酸混合。取漏斗内的扩展剂约5ml置于小烧杯中做平衡溶剂，其余的倒入培养皿中备用。2、氨基酸溶液：0.5％的赖氨酸、缬氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合物（各组分浓度均为0.5％）3.显色剂:0.1％茚三酮-正丁醇溶液五、操作方法将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中取层析滤纸一张，在纸的一端距边缘2－3cm处用铅笔划线，每隔2cm做一个记号用毛细管将各氨基酸样品分别点在这四个位置，干后再点一次用別针缝成筒状，将盛有20ml扩展剂大额培养皿迅速置于密闭的层析缸中并将滤纸直立于培养皿中，待溶剂上升15－20cm时取出滤纸，用铅笔描处溶剂前沿界限，自然干燥或用吹风机热风吹干用喷雾器均

3、匀喷上0.1％茚三酮正丁醇溶液,置于烘箱中烘烤5min（100℃）或用热吹风吹干计算各种氨基酸的Rf值六、注意事项在操作过程中，手不要摸滤纸。点样直径不超过3mm。点样的一端朝下,扩展剂的液面需低于点样线1cm。即时取出滤纸,以免出现氨基酸层析跑到滤纸的外面不能检测。