丁酸梭菌与鼠李糖乳杆菌体外混合培养对肠道致病菌的影响.doc

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1、［摘要］木试验研究了丁酸梭菌与鼠李糖乳杆菌混合培养对肠道屮沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌和大肠杆菌4种致病菌的影响。结果表明：丁酸梭菌对这4种菌均有明显的抑制作用，可使其菌落数下降3-5个数量级；鼠李糖乳杆菌可降低产气荚膜梭菌、沙门氏菌菌落数；丁酸梭菌与鼠李糖乳杆菌混合培养可使4种致病菌菌落数均下降3〜4个数量级。由此可见，两种菌混合培养对4种病原微生物的抑制无协同作用。［关键词］丁酸梭菌；鼠李糖乳杆菌；混合培养；肠道致病菌[Abstract]Thisexperimentwasconduetedtostudytheeff

2、ectsofthemixedcultureofClostridiumbutvricumandLac-tobacillusrhamnosusonintestinalpathogens,includingSalmonellagallinarum,Staphylococcusaureus,Clostridiumperfrin-gensandEscherichiacoli.Theresultsshowedthat:theClostridiuinbutyricumsignificantlyinhibitedthenumberofthese

3、fourtypesofbacteriaandmadethemdown3〜5ordersofmagnitude；LactobacillusrhamnosusreducedClostridiumper-fringens,Salmonellagallinarumcolonies；themixedcultureofClostridiumbutyricumandLactobaci]lusrhamnosusmadefourkindsofbacteriadown3~4ordersofmagnitude.Theresultsindicatedt

4、hatthemixedcultureofstrainshadnosyner-gisticinhibitioneffectonthefourkindsofpathogenicmicroorganisms・[Keywords]Clostridiumbutyricum；Lactobacillusrhamnosus；mixedculture；entericpathogens丁酸梭菌属于梭菌属，是一种专性厌氧的革兰氏阳性芽抱杆菌，其广泛分布于土壤，也能从健康动物的肠道中分离岀来。丁酸梭菌适合动物的肠道厌氧环境（呼慧娟等,2011）,可以控

5、制消化道紊乱（张晓阳等,2012）,有效抑制有害菌（曹广添等，2012）。鼠李糖乳杆菌属于乳杆菌，具有较强的酸及胆-碱耐受能力（王土华等，2008）,有抑制有害菌的作用（吴光伟和韩建春，2009）,具有抗氧化活性，并且可以影响机体免疫功能。目前丁酸梭菌与鼠李糖乳杆菌均被广泛用作饲料添加剂，木试验研究了丁酸梭菌与鼠李糖乳杆菌联合培养对产气荚膜梭菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌的抑制作用，为微生物制剂联和使用提供理论依据。1材料与方法1.1试验材料1.1.1菌种、试剂及培养基丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum

6、,IIJCB998),由浙江惠嘉生物科技有限公司提供;鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamno-sus,ATCC7469)、产气荚膜梭菌(Clostridiumper-fringens,ATCC13124),均由广东省微生物菌种保藏中心提供；大肠杆菌C83928(EscherichiacoliC83928)>沙门氏菌(Salmonellagallinarum,C79)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureaus,SHZ018),均由浙江大学动物科学学院研究室提供。琼脂、氯化钠为分析纯。厌氧液体培养基、

7、LB液体培养基、LB琼脂培养基、强化梭菌培养基(RCM)、DRCA梭菌选择性培养基、伊红美蓝培养基(EMB)、乳酸细菌培养基(MRS)、BP培养基、HE培养基、SC培养基，均购H北京陆桥生物科技有限公司。1.1.2主要仪器与设备厌氧培养箱、灭菌锅、恒温培养箱、培养皿、超净工作台、试管、接种坏等。1.2试验方法1.2.1菌种活化丁酸梭菌活化：将冻干管保藏菌株接种于装有梭菌液体培养基的试管屮，置于厌氧培养基中37°C静止厌氧培养48h,取0.1ml转接装有9.9mL厌氧液体培养基的试管，厌氧静止培养16ho产气荚膜梭菌及鼠李糖乳杆菌

8、活化：在超净台内，取一定量的无菌水迅速加入打开的冻干管，轻轻将菌粉混匀溶解，然后将菌液分别转接LB斜面及厌氧液体培养基，置37°C厌氧培养48h示，取1环菌种接种于装有9.9mL厌氧液体培养基的试管,厌氧静止培养16ho1.2.2培养物的制备将活化好的0.1mL