《植物组织培养技术》文字素材5（苏教版选修1）.doc

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1、植物组织培养技术植物组织培养（Planttissueculture）是指在无菌条件下,将离体的植物器官（根、茎、叶、花等）、纽•织（如形成层、花药纽•织、胚乳、皮层等）、细胞（体细胞和生殖细胞），以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使其长成完整的植株，统称为植物组织培养。植物组织培养的过程可概括为：r根、峑、叶竽器官「外植体旦亠愈伤组织一匕匚世〜、或,一＞完黠植株.胚状体J茎尖、胚及子房等器官做外植体可不经脱分化直接形成试管苗。植物组织培养技术是生物技术的重要组成部分，在生产实践及基因丁•稈、遗传转化等研究屮有重要

2、应用前景。植物脱毒及离体快繁，花药培养与单倍体冇种、幼胚培养与试管受精，抗性突变体的筛选与体细胞无性系变界，植物产品的工厂化生产等方血的研究和应川，均必须借助植物纟ft织培养技术的基木程序和方法。通过木实验，要求同学掌握植物纟h织培养操作技术；了解外植体脱分化及再生的过程；理解植物细胞全能性。一、试材与用具1.植物材料：花生、烟草、苹果、大白菜、玉米等。2.实验室：准备室、接种室、培养室等。3.仪器设备：高压灭菌锅（器）、光照培养箱、振荡培养箱、天秤、酸度计、超净工作台等。4.器械及用具：银子、手术刀、接种针、细菌过滤器、记号笔等。5.玻

3、动髀皿：三角瓶、培养瓶、培养皿、量筒、容量瓶等。二、方法步骤（一）培养基的制备1.母液的配制在植物组织培养屮，不同的植物，不同的器官和组织，不同的研究目的，使用不同的培养基,培养基尽管千差力别，按其性质和含量来分主要由以下儿部分组成：①无机营养，包括大量元素和微量元素；②有机物质；③铁盐；④碳水化合物；⑤天然复合物；⑥激素；⑦琼脂（固体培养基）；⑧其他添加物。在培养基的配制屮，对备组分的成分，常先要按其需川量扩大一定倍数，配制成母液（表2—1）。配制母液时应注意以下两个方面：（1）配制大量元索母液时，为了避免产生沉淀，各种化学物质必须充分

4、溶解麻才能混合，同时混合时要注意先后顺序，把钙离了（C評）、猛离了（M*）、狈离了（Ba2*）和硫酸根（SO；）、磷酸根（PO?）错开，以免形成硫酸钙、磷酸钙等沉淀，并且各种成分要慢慢混合，边混合边搅拌。（2）备类激素用量极微，其母液一般配制成0.1~1mg/mlo有些激素配制母液时不溶于水，需经加热或用少量稀酸、稀碱及95%酒精溶解麻再加水泄容。常用激索类的溶解方法如下：蔡乙酸（NAA）：先用热水或少量95%酒精溶解。眄I味丁酸（IBA）：先用少量95%酒精溶解后加水，如溶解不完全再加热。激动素（KT）、（KIA）、（6-BA）：要先溶

5、于1N盐酸。玉米素（ZT）、（ZEA）：先溶于95%洒精，再加热水。2,4-D：需用1NNaOH溶解再定容。2.培养基的配制、分装及灭菌根据培养基的成分及用量，吸取各种母液，称取蔗糖（…般用量3%）,加水至所需体积，待蔗糖全部溶解麻,丿IJ1mol/L的NaOH或HCI调酸碱度至pH5.&加入琼脂粉（一般6.5〜8g/L）,加热使琼脂完全熔化，蒸馆水补齐溶液体积，分装在三角瓶或培养瓶屮，高压灭菌。不耐高类别成分规定IB称取量博液体枳（ml）扩大倍数配1升培养基的吸取虽（ttl）大a元素KNO?NUNOjMgSO4•/H2Okh2po4Ca

6、Cl2•2H3OI96016503/'J17044)19000165003/UO17004400100010】0C微量元素MnS04-1H2OZnSO4•7H2OH3BOjKINMQ•?H2OCuSO4・5HjOCoCh•6E2C22.308.66.20.830750.0250.025223086062083752525100010010铁盐NaJEDTA■FeSO.•7址037.2527.85372527851000：0010有机物质out盐酸OkKK盐酸毗哆黃烟酸肌醇2.00.40.50.51001002025255000500100

7、10（二）外植体取材、消毒及接种1.取材与消毒白大［□取材或温室取材时应选取无病、无虫、生长健康的外植体。外植体表面消毒的…般稈序为：外植体-白来水多次漂洗-消毒剂处理-无菌水反复冲洗-无菌滤纸吸干。常川消毒剂的种类，使用浓度及消毒时间等见表2—2。表2-2常用消毒剂的使用及效果消毒剂使用宋度消除箱易消宙时灭繭效果次氧酸钠2%易5-30很好次氯酸970%易5〜30很好漂白粉饱和溶液易5〜30很好升汞0.1-1%较对2〜10杲好酒糅70〜75%易0.2〜2好过氧化氢1CT2%最易5〜15好溟水1-2%易2-10很好硝酸很1%较难5〜30好抗

8、生素4~50irol•L•中等30〜60较好2.无菌操作（1）接种室消毒超净工作台面70%酒精试擦，打开紫外灯照射20分钟，进行无菌室及超净T作台杀菌。（2）材料的接种操作人员接种前必须剪除指