电镜切片样品制作步骤.doc

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1、扫描电镜样品的准备A悬浮培养的细胞、细菌、血细胞、精子等；细胞使用PBS或无血清培养基离心漂洗1~2次以去除血清，离心转速依据不同离心机、不同样品自定，总时间控制在5min内；细胞团根据预设浓度在适量2.5%戊二醛吹悬，滴加在预先置入青霉素小瓶中的托盘，4℃静置沉降2~3天，在托盘周围加入PBS，以防止样品干燥。B贴壁培养的细胞：在培养皿中预先加入盖玻片，使细胞贴附于盖玻片上；PBS或无需请培养基漂洗后，放置在培养板室温固定1h，4℃3h，注意放置干燥，自行转入青霉素小瓶中，加满PBS送检。SE

2、M标本处理必须使用玻璃容器，需明确所用盖玻片尺寸可以放入青霉素瓶。C组织取材样品观察表面可达8~10mm2,高度小于5mm左右；样品表面在固定前必须清洁：使用生理盐水或PBS冲洗掉表面的灰尘以及不需要观察的蛋白、粘液等。能够明确标识标本的观察面。消化道、呼吸道、血管、生殖器官、泌尿等官腔内表面，尤其要注意先清洗再固定。如需要观察脏器内结构，应依照不同的实验目的，决定目的脏器是否需要灌注清洗；²固定2.5%戊二醛浸没标本，室温1h，4℃固定3h以上，换PBS送检。附：2.5%戊二醛的配制Step1

3、:0.2M磷酸缓冲液的配制：---------------------磷酸二氢钠（NaH2PO4.H2O）　　　　2.6克磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)　　　　29克双蒸馏水　　　　　　　　　　加至500毫升pH调至7.4Step2:戊二醛固定液的配制：---------------------25%戊二醛　　　　　　1ml双蒸馏水　　　　　　　4ml0.2mol/L磷酸缓冲液　　5ml戊二醛最终浓度　　　　2.5%pH值7.3-7.4精选范本,供参考！透射电镜样品的制备一、培养细胞²

4、本方法适用于贴壁、悬浮培养的细胞；细菌；精子；血细胞等。1.细胞数量：106或6孔板一孔的细胞达到生长面积的80%或以上。2.离心收集：消化或用细胞刮刮下细胞。如细胞状态一般或漂浮物较多，建议更换新培养基；如观察自噬，建议刮下细胞。3.离心速度、时间依据不同离心机、不同样本自行定义，时间在5min内；4.细胞团大小：细胞最厚处约0.5~1.5mm,或者参照1元硬币的厚度；5.细胞离心成团后去除上清，加2.5%电镜用戊二醛500μl固定，切勿吹悬，室温1h，4℃3h后，去除戊二醛加满PBS后4℃放

5、置或送检。²注意：固定细胞不需要吹悬，细胞不宜过多，过多会导致固定液无法迅速渗透到底部细胞；二、生物组织迅速剪下/切下相应位置，在2.5%戊二醛中，依据不同组织和实验目的，用刀片修成1mm3的小块或__mm2×2mm长条或薄片状。在2.5%戊二醛室温1h，4℃3h，去除戊二醛加满PBS，4℃放置或送检。标本固定时，尽量修饰成合适的形状，对于需要定位的标本，离开实验室者后比较难以确认所需要的位置。使用2ml圆底或尖底的EP管，勿用500μl以下的EP管。²块状标本基本包含的组织类型：脑、肾、肝、肺

6、、心肌；²长条状、薄片状标本基本包括：骨骼肌、平滑肌：肌纤维方向与标本长轴平行或垂直（送样时说明方向）皮肤、毛囊：皮肤角质层与长轴平行；神经、直径在2mm内的小血管：其长轴与标本块长轴平行的长条消化道、大血管：长条片状，一侧是上皮、内皮细胞面，或依据目的去除无用的分层脑皮质、海马、耳蜗等：具有方向性或需横切或纵切面或需要组织中某一特定位置的标本；具体到某些组织，可能会有不同的要求，如观察海马CA1区，建议标本取片状或近似三角形的片状或梯形（比较好）。直观的说，小块直径约为1元硬币厚度；长度的短轴

7、约为1元硬币的厚度；具体大小根据标本会有相应的调整，但都已小尺寸为佳。【本文档内容可以自由复制内容或自由编辑修改内容期待你的好评和关注，我们将会做得更好】精选范本,供参考！