微生物的显微直接计数.ppt

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1、实验四微生物的显微直接计数微生物的显微直接计数目的要求实验原理实验材料实验程序思考题目的要求了解血球计数板的构造和使用方法。学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。实验原理血球计数板通常是一块特制的厚载玻片，载玻片上有四条槽而构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽而隔成两半，每个半边上面各刻有一个方格网，每个方格网共分九大格，其中间的一大格又称为计数室，微生物的计数就在此大格中进行。常用的血球计数板的计数室有两种规格的刻度网格。一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，即为16×25。另一种是一个大方格分成25个中方格

2、，而每个中方格又分成16个小方格，即25×16。但是不管计数室是那种规格，其计数室的小格数总是相同的，即16×25＝25×l6＝400（小格）。计算每一个大方格边长为1毫米，则每一大方格面积为1平方毫米。盖上盖玻片后，载玻片计数室与盖玻片之间的高度为0.1毫米，所以每个计数室（大方格）的体积为0.1立方毫米。在计数时，通常数五个中方格的总菌数，求得平均值。再乘上16或25就得一大方格中的总菌数。然后再换算成1毫升菌液中的总菌数。（1毫升＝1立方厘米＝1,000立方毫米）彼得罗夫-霍瑟（PetroffHausser）细菌计数板两种计数板的原理和部件相同

3、。只是细菌计数板较薄，可以用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。实验材料酵母菌悬液显微镜，血球计数板。盖玻片，无菌滴管，吸水纸，擦镜纸，香柏油、镜头洗液。实验程序计数步骤：1.取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。2.取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。3.静置5分钟后，将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数板的大方格网位置。寻找时光圈要缩小，光线要偏暗些，并将计数室移至视野中央。4.在高倍镜下计数：随机地计数五个中格内的菌数，然后求得每个中格的平均值。

4、乘上16（或25）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每毫升菌液中的含菌数量。由于菌体细胞在血球计数板上处于不同的空间位置，要在不同的焦距下才能看到，故观察时必须不断调节微调节器，方能数到全部菌体，以免遗漏。5.计算方法：酵母菌细胞数／毫升=[（X1+X2+X3+X4+X5）/5]*25（或16）×10×1000×稀释倍数6.注意事项。计数时，为避免重复或遗漏计数，凡是遇到压在方格线上的菌体，一般以压在底线和右侧线上的菌体计入本格内，遇到有芽体的酵母时，如果芽体和母体同等大时，就按两个酵母菌体计数。7.计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水

5、纸吸干，最后用擦镜纸擦干净并放回盒。思考题为什么计数室内不能有气泡？试分析产生气泡的可能原因是什么？根据你实验的体会，说明血球计数板计数的误差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差，力求准确？ThankYou