实验四 、微镜下细胞数量测定.ppt

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1、实验四微生物显微镜下的直接计数一血球计数板测定微生物细胞的数量1实验目的2实验原理3实验材料4实验方法步骤5实验报告1实验目的掌握血球计数板测定微生物细胞数量的原理。学习用血球计数板测定微生物细胞数量的方法。2实验原理利用血球计数板在显微镜下直接计数，是将菌悬液放入血球计数板与盖玻片之间的计数室中，然后在显微镜下计数，因为计数室容积一定，所以可根据测定值推算出菌悬液单位体积所含微生物的总数量。血球计数板的结构它是特制的厚载玻片，中央区域有四条凹槽而形成三个平台，中间平台较宽，它又被一短横槽分隔为两部分，每一部分均

2、有一个方格网，每一方格网可分为九个大方格，中央大方格就是计数室。大方格分为16个中方格，每个中方格又可分为25个小方格。每个大方格共含有400个小方格。计数室大方格边长为1mm，底面积为1mm2，高0.1mm,所以每个计数室固定容积为0.1mm3。计数方法在计数时，用含16个中方格的计数板，要按对角线方位计数左上、左下、右上、右下等四个中方格（100个小方格）所含有的菌数；由此可计算得出每个小方格所含有的菌数的平均值，计数室每个小方格容积为：0.1×10-3÷400＝1／4×10-6(ml)每ml含的小方格数＝1/

3、（1／4×10-6）=4×106=K计算公式：每ml菌液含菌数=N×K×d(N：每个小方格含菌数平均值；d：菌液稀释倍数；K　=　4×106)3实验材料稀释100倍的酵母菌菌悬液即d=100实验步骤1镜检计数室：对计数室进行镜检，若内有污物，清洗后才能计数。2加样液：先在血球计数板两个计数室部位加盖玻片，再用无菌玻棒或滴管沾取待测菌悬液稀释液（已摇匀），从盖玻片边缘滴加，使菌液沿缝隙靠毛细作用自行进入计数室内。静置5min。3显微镜计数：将血球计数板置于载物台上，先用低倍镜观察，后换高倍镜观察计数。位于格线上菌体只

4、计上边线和左边线上的，如果出芽酵母芽体大小达到母细胞一半时，可计作两个菌体。选择五个视野，在每个视野内任意选择五个小方格计数，求出每个小方格菌体数量平均值。4根据公式计算每ml菌液含菌数。5测量完毕后，取下盖玻片用水冲洗血球计数板（严禁用硬物刷洗），晾干，放入盒内保存。实验报告取点各视野每个小方格含菌数平均值每个小方格含菌数平均值K菌液稀释倍数每ml菌液含菌数12345视野123531231534353140456思考题写出实验的注意事项.