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1、2012.10.27组会报告dldhierarch观点：前列腺素E2（PGE2）可以经由DNA的甲基化作用的途径使得某些抑癌基因和DNA修复基因沉默，从而促进了肿瘤的生长。DNAmethylation概念：DNA甲基化是DNA化学修饰的一种形式；即在甲基转移酶的催化下，DNA的CpG两个核苷酸的胞嘧啶被选择性地添加甲基，形成5－甲基胞嘧啶。作用：DNA甲基化可使基因沉默化，进而使其失去功能。DNA甲基化可引起基因组中相应区域染色质结构变化，使DNA失去核酶限制性内切酶的切割位点，以及DNA酶的敏感位点，使染色质高度螺旋化，
2、凝缩成团，从而失去转录活性。DNA甲基转移酶分类DNMT1——持续性DNA甲基转移酶——作用于仅有一条链甲基化的DNA双链，使其完全甲基化；DNMT3a、DNMT3b——从头甲基转移酶——它们可甲基化CpG岛，使其半甲基化，继而在DNMT1的作用下全甲基化。从头甲基转移酶可能参与细胞生长分化调控，其中DNMT3b在肿瘤基因甲基化中起重要作用。DNAmethyltransferaseCPGislandCpGisland——C、G富集区——通常这些位点很容易发生甲基化★在人类基因组内，GC的含量大约为40%；这些GC并不是平均
3、分布在基因组内，在某些DNA片段上其含量可高达60%以上，而在另一些区域则只有33%左右。这种GC含量的差别，在基因表达的调控和基因突变上都可能扮演着重要的角色。★在基因的末端和启动子区域通常存在一些富含双核苷酸“CG”的区域，称为“CpG岛”，这些CpG岛不仅是基因的一种标志，而且还参与基因表达的调控和影响染色质的结构。★正常细胞的CpG岛由于被保护而处于非甲基化状态。全基因组低甲基化，维持甲基化模式酶的调节失控和正常非甲基化CpG岛的高甲基化是人类肿瘤中普遍存在的现象。以往的研究证明启动子区的高甲基化导致抑癌基因失活是
4、人类肿瘤所具有的共同特征之一，而且这种高甲基化是导致抑癌基因失活的机制。通过检测结直肠癌样本中的各自mRNA表达水平发现PGE2和PGTS2（COX-2）和DNMT1和DNMT3B的表达是相关的PTGS2——前列腺内过氧化酶2COX-2（环氧合酶2）——是PGE2的介导物质；当身体组织受到某种刺激如外伤、感染等会活化环氧合酶，能够使花生四烯酸（Arachidonicacid）大量转变为PGE2等前列腺素。PEG2——前列腺素2前列腺素家族的类型之一（前列腺素依据分子结构的不同分为若干类型）；目前已知至少有四种GPCR,即E
5、P1、EP2、EP3和EP4,介导了PGE2的生物学功能。在LS-147T、HCA7和HT-29细胞中，PGE2的存在能够导致DNMT1和DNMT3B的表达水平的增高从而说明PGE2能够导致细胞内部的DNA甲基化水平增高WesternBlot技术的运用tumorsuppressorCDKN2B——Cyclin-dependentkinase4inhibitorBCNR1——cannabinoidreceptortype1DNArepairgeneMLH1——MutLhomolog1,coloncancer,nonpolyp
6、osistype2MGMT——Methylated-DNA-protein-cysteinemethyltransferase在LS-174T细胞中PGE2导致了抑癌基因CDKN2B和DNA修复基因MLH1启动子区域CGI的甲基化，从而沉默了该基因。硫化测序PCR（BisulfitePCR，BSP）技术的运用在LS-174T细胞中PGE2增强了抑癌基因CDKN2B和DNA修复基因MLH1启动子区域CGI的甲基化水平。甲基化特异性PCR（MethylationspecificPCR,MSP）目前，基因的甲基化研究主要结合亚硫
7、酸氢钠处理和PCR技术，分为甲基化特异性PCR（MethylationspecificPCR,MSP）和硫化测序PCR（BisulfitesequencingPCR，BSP）。技术原理：DNA经亚硫酸氢盐硫化处理后,DNA双链中的“C”转化为“U”,通过随后的PCR,将“U”转化为“T”,但亚硫酸氢盐不能使已发生了甲基化的DNA的“C”发生上述转化,因此,根据经亚硫酸氢盐处理的DNA模板设计引物时,先输入感兴趣的DNA序列,程序将会显示2种序列:一种是输入的源DNA序列;另一种是硫化处理后的DNA序列,除了CpG岛上的5甲
8、基胞嘧啶(5mC)之外,所有非甲基化的“C”都转换成了“T”,根据转化后的序列设计引物,进行BSP和MSP。1.MSP：DNA经亚硫酸氢钠处理后，所有未甲基化的胞嘧啶发生脱氨基变为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶无此改变。DNA的甲基化差异转变为序列差异，设计两对分别针对甲基化与非甲基化等位基因的引物，结合PC
