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时间:2020-01-27
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1、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数重点:从土壤中分离分级纤维素的微生物二:研究思路:(一)、筛选菌株1、Taq细菌能忍受93OC左右的高温,是美国微生物学家托马斯.布鲁克于1966年在美国黄石国家公园的一个热泉中发现的,这说明寻找目的菌株时,要根据他虽生存环境的要求,到相应的环境中去寻找。2、实验室中微生物筛选的原理:人为提供目的菌株的生长的条件(包括营养、温度、PH等),同时抑制或阻止其他微生物的生长。选择培养基:在微生物学中,将允许特定种类微生物生长,同时抑制其他种类微生物生长的培养基,称作选择培养基作
2、用:主要应用于菌种分离[分析本课题使用的培养基]:KH2PO4Na2HPO4MgSO4.7H2O葡萄糖尿素琼脂碳源:葡萄糖;氮源:尿素;无机盐:KH2PO4Na2HPO4MgSO4.7H2O凝固剂:琼脂该培养基的选择作用主要是通过尿素来实现的。原因:在这个培养基中,尿素是唯一的氮源,只有能够利用尿素的细菌才能在这种培养基上正常生活。(二)、统计菌落数目:常用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。原理:当样品的稀释度足够时,培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。注:(1)为保证结果准确,一般
3、选择菌落数在30-300的平板进行计数。(2)为增强实验准确性,一定要涂布至少3个平板,作为重复组。(4)显微镜直接计数法(镜检计数)也是测定微生物数量的常用方法,另外也可采用滤膜法(三)设置对照1、目的:排除试验组中非测试因素对实验的结果的影响,提高实验结果的可信度。注:对照实验的分类;空白对照:不给对照组任何处理因素条件对照:给对照组部分对照因素,但不是所要研究的处理因素。自身对照:对照和实验都在同一研究对象上进行。相互对照:不单设对照组,而是几个试验组相互对照。分析:P23A同学出现不同试验结果的原
4、因:①土样不同;②培养基被污染或操作有误对照组设置:方案一:其他同学取与A同学相同的图样进行培养,若结果与A相同,则说明A无误;反之,则有误。方案二:将A同学配置的培养基在不加土样情况下进行培养,作为空白对照,以证明A的培养基是否受到污染.三、实验设计:(一)、土壤取样:注:①有机物含量高,土质肥,一般其中微生物含量高。②土壤中微生物大约70℅-90℅是细菌,而细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生活,因此,在距地表3-8cm的土壤层分布较多。③取土样用的小铁铲及装土样的信封要事先灭菌。(二)样品稀释:注
5、:分离不同的微生物要采用不同的稀释度。原因:土壤中各类微生物的数量是不同的,采用不同的稀释度以保证获得菌落数在30-300之间适于计数的平板(三)涂布平板(四)微生物的培养与观察注:①细菌一般在30-37OC的温度下培养1-2天,放线菌一般在25-28OC温度下培养5-7天,而霉菌一般在25-28OC温度下培养3-4天。每隔24小时统计一次数目,防止因培养时间不足而导致遗漏菌落数目一般来说,在一定条件下,同种微生物表现出稳定的菌落特征。鉴别分解尿素的微生物的方法:在以尿素作为唯一氮源的培养基中加入酚红指示
6、剂,培养一段时间,若PH上升,指示剂将变红,则该菌种可以分解尿素。
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