石蜡包埋技术要点总结.pptx

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1、组织石蜡包埋和切片技术在制作切片或超薄切片时，由于组织是柔软的，或局部的软硬不均，这样制作厚薄均匀的切片是困难的。所以有必要用一定物质浸透组织内部，整个组织一样硬化，以利于切成薄片，这种物质叫做包埋剂。一股用光学显微镜观察的切片，用石蜡、火棉胶、炭蜡、明胶等作包埋剂；电子显微镜则用环氧树脂、聚苯乙烯树脂、异丁烯树脂及水溶性树脂。程序（一）材料的采集与分割采集材料应根据制片的目的和要求而定，材料要有代表性，无病虫害或其它损伤，如要观察病理解剖，则要取病斑、病症部位。采下的材料应立即放在标本箱或湿布包起来带回实验室进行

2、分割固定（如有条件也可在试验地采集后进行分割固定）。为使固定液能迅速的渗透材料，材料要进行分割。分割时动作要迅速，以防材料萎蔫。分割块的大小，宜小不宜大，一般不超过1cm3，分割后立即杀死固定。（二）杀死与固定利用药剂迅速把细胞杀死，以保持材料本来的状态和结构。（三）脱水脱水的目的是除去组织中的水分，便于透明、浸蜡、包埋等步骤的进行，因为这些程序中所用的药品都不能与水混合，所以必须脱水。常用的脱水剂为酒精。脱水过程应缓慢进行，不能操之过急或时间过长，以免组织变硬变脆或发生收缩现象。脱水采用等级脱水（系列脱水），即从

3、较低浓度酒精开始，逐渐替换到高浓度酒精。（四）透明透明的目的是将脱水剂从材料中除去，使材料透明，增记折光系数；同时便于下步的浸蜡和包埋等程序（因为究竟不能溶解石蜡）。透明剂是一种既能与脱水剂混合，又能与包埋剂混合的药剂。常用的透明剂为二甲苯。（五）浸蜡浸蜡的目的是逐渐除去透明剂,并为包埋剂所代替。常用的包埋剂是石蜡。浸蜡过程是使石蜡慢慢溶于浸有材料的透明剂中，溶解在透明剂中的石蜡渐渐深入到材料的细胞中去，最后使透明剂完全被石蜡取代，以便切片。（六）包埋（埋蜡、沉床）材料浸蜡后再换两次已熔融的纯蜡，然后将材料和石蜡一

4、起倒入提前叠好的包埋模具中，用加热的镊子迅速将材料按一定的间隔和所需的切面摆放整齐，同时用加热的镊子赶走材料周围的气泡，待模具表面的石蜡凝固后将纸盒平放入冷水中，使石蜡迅速凝固。最后从模具中取出蜡块，以便保存。注意将样品编号封于蜡块上，以免样品混淆。（八）切片用切片机（如旋转切片机）将蜡块切成连续的蜡带。切片时先把切片刀夹在刀架上，再把载蜡器夹在固定装置上（注意安装切刀的角度，刀口运行方向与材料切面平行），然后调整好所需厚度，一般可在7~14微米，视材料和所需观察对象而定，转动切片机切片。具体流程1脱水：多聚甲醛中

5、取出组织，流水冲洗数分钟→70%乙醇（2h,可延长过夜）→85%乙醇(2h)→95%乙醇Ⅰ(1h)→95%乙醇Ⅱ(1h)→无水乙醇Ⅰ(30min)→无水乙醇Ⅱ(30min)。注：1若组织数量过多时，应分开脱水（20个组织左右）2脱水的体积至少为组织体积的5倍3乙醇纯度越高时，脱水的时间减少，否则引起组织过硬4最好能搅拌，使脱水充分。2透明：二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ，每步15min.注：在二甲苯的时间不宜过短或过长。时间过短引起透明不充分，影响后面渗透包埋；时间过长则引起组织变脆。3渗透：石蜡Ⅰ(15-20min)→石蜡Ⅱ

6、(20-30min)→石蜡Ⅲ(包埋),62℃。4包埋：将组织放入盛有石蜡的模具中，摆好位置，于石蜡包埋机的冷台上冷却。注：包埋时，切忌用手按石蜡盒中间，因为冷凝后，中间仍较软。何师兄放到—40℃冰箱使其快速凝固。