第四章第二节a-淀粉酶的固体发酵技术.ppt

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1、第一节а-淀粉酶固体发酵生产技术霉菌а-淀粉酶大多采用固体曲法生产；细菌а-淀粉酶则以液体深层发酵为主。固体培养法以麸皮为主要原料，酌量添加米糠或豆饼的碱水浸提液，以补充氮源。在相对湿度90%以上，曲霉用32-35℃培养36-48h，立刻在40℃下烘干或风干，即成工业生产用粗酶。米曲霉固体培养法生产а-淀粉酶工艺流程：润水粉碎熟料厚层通风制曲烘干粗酶制剂抽提蒸煮过滤烘干压滤沉淀原料成品种曲原菌斜面试管培养纯种三角瓶培养种曲培养粉碎包括内容：原料的粉碎、润水及蒸煮三方面的内容目的：使蛋白质达到适度变性，淀粉充分糊化，以利于微生物的生长繁殖和代谢。处理方法：粉碎机粉碎或过筛，要求粒度为2-3

2、mm为宜，大小均匀。一、原料的处理原料的选择：麸皮40-50%（提供微生物生长繁殖需要）稻壳20-30%（改善工业培养的通风性、补充营养源）CaCO31%（用于调节pH值,酶激活剂）水30-40%蒸煮的目的使蛋白质适度变性形成变性蛋白和少量氨基易被微生物分解；促进淀粉糊化成糊精和寡聚糖。杀菌功能，利于菌体生长。高压旋转蒸煮锅（有假底式）高压旋转蒸煮锅（有假底式）高压旋转蒸煮锅（无假底式）蒸煮技术要求：①普通法：0.12Mpa，15-30min②高短法：0.18-0.2Mpa，3-5min。③淀粉充分糊化，蛋白消化率78%以上。熟料的要求：呈浅淡的黄褐色，有香味及弹性，无浮水，无硬心，不粘

3、，无其他不良气味，水分含量为46%-50%（因季节而异），消化率在78%以上。（一）菌种的选择由于不断的选育改良，现在工业生产上用的菌种产生а-淀粉酶的能力已经是原有野生菌种的数倍或数十倍。目前，我国常采用的霉菌为米曲霉612或2120。它具有遗传性能稳定，不产生有毒代谢产物，生产周期短，酶活性高等特点。二、种曲的制备（二）、菌种扩大培养1、斜面试管培养将原菌种接入米曲汁或麦芽汁琼脂斜面培养基，经过32-34℃，70-72h试管培养，待菌丝布满斜面，并着生黄绿色的孢子即已成熟，可作为下一步培养的种菌或在低温下（0-4℃）储藏备用，每3个月转接一次。2.纯种三角瓶种子培养（1）培养基：25

4、g麦麸，5g玉米粉及30mL水，加HCl三滴，搅拌后装入500ml三角瓶中，包扎后120℃灭菌30min，冷却，备用。（2）接种量：每支斜面试管菌种接种三角瓶培养基5-6支。（3）培养：接种后将三角瓶置于32-34℃下培养，约18h后，菌丝体发白结饼，此时应摇瓶，打碎结饼。再过4h，菌丝体再次发白结饼，再次摇瓶。培养18h后，应将其倾斜放置，并注意摇瓶，直至长满均匀一致的黄绿色孢子，即可作为三角瓶种子，冷藏备用。3、种曲培养：（1）、设备：种曲室，曲盘、草帘、纱布等（2）、灭菌常用灭菌剂方法一：KMnO4：甲醛=1：2熏蒸（注意用氨水收）方法二：硫磺：甲醛=2.5：1加热熏蒸（注意控制，

5、防止着火）。用量以甲醛10g/m3空气量进行计算。（3）、培养方法：（3天曲法）接入量为0.5-1.0%，料层厚1cm左右为宜直立式堆叠曲房保温28-30℃培养，干湿相差1°16h培养当品温达到34℃左右时，曲料面层稍有发白及结快时，进行第一次翻曲。十字堆叠室温继续保持在28-30℃，翻曲后4-6h，品温可达到36℃左右，在进行第二次翻曲，注意保持水分3天后，种曲成熟，麦麸上布满黄绿色孢子。既为种曲。（4）、种曲质量检验A镜检孢子数法：显微镜直接观察种曲稀释液中的孢子数。要求≥25-30亿个/g种曲（湿基计）B摇落孢子数法：称取10g种曲，烘干后摇落其孢子（用75目筛D=0.2mm），求

6、干孢子与干物质的百分数，一般要求在18%左右。C发芽率测定法：利用悬滴培养法。要求发芽率≥90%。PROTEIN&ENZYMEENGINEERING1、外观检验孢子旺盛，呈新鲜的黄绿色，具有种曲特有的曲香，无夹心，无根霉、青霉等其他杂色。2、孢子数测定菌悬液无菌水溶液培养基三、厚层通风制曲厚层通风制曲：就是将曲料置于曲池内，其厚度为25-30cm，利用通风机供给空气及调节温度，从而促进米曲霉迅速生长繁殖。1、制曲设备大小：10～12×8×3m为宜①曲室（空调箱）结构：保温，双层门，弧形顶，天窗②曲池：大小：8～10×2×0.6-0.8m为宜③通风机：目前常采用的是中压型通风机（H100﹤

7、300mm汞柱）。通风量一曲池内物料重量的4-5倍m3空气量/h为宜。④翻曲机及曲铲（双转式）2、冷却及接种原料拌匀，蒸煮后冷却至30℃，接种量0.5%，拌匀入池。3、制曲工艺霉菌生长规律工艺流程铲曲曲料入池孢子发芽期静止培养菌丝生长期通风培养菌丝繁殖期第二次翻曲第一次翻曲孢子着生期（淀粉酶分泌最旺盛）成曲4、制曲不当常出现的问题酸曲原因：曲料水分过高或通风不良使产酸菌如小球菌、粪链球菌生长繁殖，PH值降低。防治方法：降低曲料水分，