苯丁酸钠对入胃癌细胞株.ppt

《苯丁酸钠对入胃癌细胞株.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、苯丁酸钠对入胃癌细胞株SGC．7901的抗增殖和诱导分化作用的研究研究背景：胃癌是威胁人类生命健康最常见的恶性肿之一，化疗是其重要的治疗手段之一。恶性肿瘤诱导分化治疗，是近年来倍受关注的新策略，高效低毒的诱导分化剂是这一策略的核心，脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠是理想材料。脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠的特点：高效、低毒、广谱的诱导分化新药；白血病、胶质细胞瘤、富颈癌等多种肿瘤细胞株有生长抑制和诱导分化的作用；有效药物浓度在机体内容易达到，在对肿瘤细胞发挥抑制作用时对正常细胞影响甚微，即使较大剂量长期应用也不至于出现骨髓抑制、免疫

2、功能低下等现象。观察苯丁酸钠在体外对人胃癌细SGC．790l的生长抑制作用、诱导细胞形态变化、细胞周期改变、以及对5一FU作于胃癌细胞株SGC．7901的抑制作用的影响，为临床胃癌的治疗提供实验依据。研究目的：研究方法：(1)对照组：正常培养细胞，不添加任何药物；(2)苯丁酸钠组：分8个亚组，浓度分别为0．25mmol／L、0．5mmol／L、lmmol／L、2mmol／L、4mmol／8mmol／L、l6mmol／L和32mmol／L；(3)5一氟尿嘧啶(5-FU)组：分4个亚组，浓度分别6．25mg／L、12．5mg

3、／L、25mg／L和50mg／L；(4)联合用药组：苯丁酸钠浓度为8mol／L，5一FU浓度分别为6．25mg／L、12．5mg／L、25mg／L和50mg／L。注意：MTT法检测苯丁酸钠对人胃癌细胞株SGC．790l不同作用时间的生长抑制作用以及苯丁酸钠和5一FU联合应用对胃癌细胞株SGC、-790l的抑制作用。流式细胞术检测苯丁酸钠对SGC．790l胃癌细胞周期的影MTT法检测苯丁酸钠对人胃癌细胞株SGC．790l不同作用时间的生长抑制作材料与方法(一)主要试剂1、PB2、5一氟尿嘧啶(5．FU)3、RPMIl640

4、培养基4、新生牛血清5、二甲基亚砜(DMSO)6、四甲基偶氮唑蓝(MethythiazolyltetrazoliumMTT)7、青霉素和链霉素8、96孔板9、胰酶(二)主要器材l、细胞超净工作台2、细胞C02培养箱3、流式细胞仪4、酶标仪5、倒置显微镜6、医用低速离心机实验步骤l、细胞培养相关溶液配制：2、四甲基偶氮唑蓝(MTT)3、检测细胞周期所用溶液配制：4、苯丁酸钠(PB)溶液的配制：3、检测细胞周期所用溶液配制：实验分组l、对照组：只培养细胞，不加任何药物；2、单纯PB作用组：只加入PB，终浓度分别为0．25mm

5、ol／L、O．5mmol／L、Immol／L、2mmol／L、4mmol／L、8mmol／L、l6mmol／L、’32mmol／L：3、单纯5一FU作用组：只加入5一FU，终浓度分别为6．25mg／L、l2．5mg／L；25mg／L、50mg／L；4、PB与5一FU联合作用组：既加入PB由加入5．FU，PB终浓度为8mmol／L，5一FU终浓度分别为6．25mg／L、12．5mg／L、25mg／L、50mg／L。(三)检测方法：l、MTT比色法检测苯丁酸钠对SGC．790l细胞抑制率的影响2、流式细胞仪(FCM)检测细胞

6、周期3、在倒置相差显微镜下观察苯丁酸钠作用后细胞形态的变化，并拍照。4、MTT比色法检测苯丁酸钠对5一FU作用于人胃癌细胞株SGC．7901抑制作用的影响实验方步骤l、细胞培养相关溶液配制：(1)青、链霉素(2)RPMll640培养基(3)25XPBS浓缩液：(4)PBS工作液：(5)0．25％胰蛋白MTT比色法检测苯丁酸钠对SGC．790l细胞抑制率的影响1)分组处理：取对数生长期细胞以O．25％胰酶消化，配成单细胞悬液，以5Xl03个细胞／孔接种于96孔板中，每孔培养基定量为2001．tl，置入二氧化碳培养箱中，常规

7、培养24小时(细胞完全贴壁)后，更换RPMll640培养液(含血清及双抗)，定量使终体积为200lal，分组处理。共分为9组(每组设4个复孔)：加入苯丁酸钠，使其终浓度分别为0．25mmol／L、0．5mmol／L、lmmol／L、2mmol／L、4mmol／L、8mmol／L、l6mmol／L、32mmol／L和0mmol／L(阴性对照组)。另设空白对照组，不接种细胞，仅加入等量完全培养基(含1O％的新生牛血清及双抗的RPMI．1640)。以上各组细胞均于培养24h(小时)、48h、72h、96h、l20h五个时间点时

8、用MTT比色法检测细胞活性。苯丁酸钠对人胃癌细胞株SGC．7901抑制率测定各组均于培养24h、48h、72h、96h、120h后吸净培养液，每孔加入180

9、Il新鲜RPMll640培养液(含血清及双抗)，再加入20ulMTT溶液(5mg／ml，即0．5％MTT)，其中调零组不加MTT溶液，仅加入20ul新鲜RPMl