课题2　月季的花药培养.pptx

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1、知识回顾单倍体育种的过程？花药离体培养单倍体植株（N）秋水仙素处理，使染色体加倍植株（2N）2、明显缩短育种周期特点：1、后代植株都为纯合子正常植株（2N）花粉粒（N）3、为新品种的培育开辟了新途径课题2月季的花药培养花药花丝雄蕊柱头花柱子房萼片胚珠花瓣花托雌蕊图1花的基本结构1、被子植物定义：凡是种子有果皮包被着，胚珠有子房壁包被着的植物，就叫做被子植物实例：梨、杏、玉米、大豆一、基础知识（一）被子植物的花粉发育花丝花药：囊状结构，内有很多花粉2、雄蕊3、花粉的概念:由花粉母细胞经过_____分裂形成的单倍体的生殖细胞.减数小孢

2、子母细胞(花粉母细胞)减数分裂4个小孢子（小孢子四分体时期）小孢子单核期（单核居中期→单核靠边期）有丝分裂每个小孢子花粉管细胞核生殖细胞核（双核期）营养细胞生殖细胞有丝分裂2个精子}思考：在正常情况下，一个小孢子母细胞可以产生几个精子？8个（控制花粉的萌发并提供营养）注意：两个精子和一个营养核的基因型相同4．发育过程(1)_____________：4个单倍体细胞连在一起。(2)单核期：细胞含有浓厚的_______，该期又可分为____________和单核靠边期两个时期。（3）双核期：细胞中含有______细胞核和______细

3、胞核，它们分别形成一个营养细胞和一个生殖细胞，其中的生殖细胞形成两个精子。四分体时期原生质单核居中期生殖花粉管被子植物花粉发育过程中的四分体时期与减数分裂过程中的四分体时期是同一阶段吗？思考前者是指4个单倍体细胞连在一起的时期；后者是指同源染色体配对后，一对同源染色体含有四条染色单体的阶段。不是（二）、产生花粉植株的两条途径胚状体分化花药中的花粉愈伤组织丛芽脱分化再分化生根移栽诱导1．产生花粉植株（即单倍体植株）的两种途径：一是花粉通过胚状体阶段发育为植株，二是通过愈伤组织阶段发育为植株。这两种途径的区别主要取决于培养基中激素的种

4、类及其浓度的配比2．培育花粉植株的途径图解3．胚状体的结构及其发育过程与种子相似，所以把胚状体到从芽的过程称为分化，而把从愈伤组织到从芽的过程称为再分化。4．植物体细胞发育而来的胚状体又叫体细胞胚，花粉发育而来的胚状体叫花粉胚，可发育为单倍体植物，要使其成为纯合的正常植株，可用秋水仙素处理发育中的幼苗。（三）影响花药培养的因素阅读P38-39思考：诱导花粉植株能否成功及诱导成功的高低，主要影响因素是____________和___________-材料的选择培养基的组成a.材料选择什么时期最好，为什么？b.如何选择单核期细胞？c.

5、为什么花瓣松动会给消毒带来困难？d.还有哪些影响花药培养的因素？花期为初花期，花粉发育在单核靠边期，成功率最高。亲本植株的生长条件，材料的预处理及接种密度等选择完全未开放的花蕾微生物可能侵入花药，给材料消毒带来困难二、实验操作（一）材料的选取②某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。①最常用的方法有醋酸洋红法1、方法从花药看：月季的初花期从花粉看：单核期从花蕾看：完全未开放的①醋酸洋红法染色机理醋酸洋红为碱性染色剂，而花粉细胞内有染色体，染色体主要成分是DNA和蛋白质,易被碱性染料着色

6、染成红色。将体积分数45％的醋酸100ml煮沸，缓缓加入1g洋红，在加热回流8h，冷却至50℃，过滤即可。②醋酸洋红的配置2、醋酸洋红法③染色操作花药（载玻片上）→1%的醋酸洋红1滴→用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成红色）将5g铬明矾[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸馏水中，溶解后加入0.1g焙花青，混匀并加热至沸腾，煮沸5分钟后冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容至100ml。②焙花青—铬钒溶液的配制方法③染色操作3、焙花青—铬钒法将无水酒精与冰醋酸按体积比为3：1的比例混匀①卡诺氏固定液

7、的配制方法花药（在卡诺氏固定液中处理20min）→取出，置于载玻片上→焙花青－铬矾溶液染色→盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色）5、无菌水冲洗3～5次花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态1、花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒2、无菌水清洗3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2～4分钟（质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）（二）材料的消毒为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困

8、难？讨论：（三）接种和培养1灭菌后花蕾，要在下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。3通常每瓶接种花药，温度控制在左右，。幼小植株形成后才。2在剥离花药时，要尽量（同时还要彻底。4进一步鉴定和筛选：常常会出现染色体倍性的变化无菌条件不损伤花药