dd第四次实验 血钙 血磷测定.ppt

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1、第四次实验钙、磷、试剂空白测定目的与要求1.掌握钙、磷的测定原理和操作方法2.掌握试剂空白测定的应用3.了解钙、磷的测定的临床意义一、血清钙离子测定甲基麝香草酚蓝比色法邻甲酚酞络合酮法（临检中心推荐）原子吸收光谱法离子选择电极法(一)实验原理血清中钙离子在碱性溶液中能与甲基麝香草酚蓝染料结合，生成有色复合物。(二)试剂显色试剂碱性试剂标准液MTB8-羟基喹啉乙醇胺碳酸钙2.50mmol/L工作液：显色试剂与碱性试剂等量混合(三)操作1.检测参数主波长：612nm温度：室温。2.空白管标准管样本管工作液2.0ml去离子水20u

2、l）工作液2.0ml工作液2.0ml钙标准液20ul血20ul3.分别混匀各管，室温放5分钟，　以空白管校零，记录各管吸光度。4.结果钙(mmol/L)=样本管吸光度标准管吸光度×标准液浓度(四)临床意义1.参考值：2.1—2.9mmol/L。生命危急值：1.7mmol/L，3.3mmol/L。2.增高：甲旁亢、多发性骨髓瘤、VitD增多症、代酸等3.降低：甲旁减、尿毒症、佝偻病等。(五)方法评价1.重复性、准确度较好、简便、易于自动化。2.线性：在样本浓度0-3.75mmol/L范围内,线性良好。3.精密度：批内CV≤5

3、％。批间相对误差≤54.易受干扰。三、无机磷的测定磷钼酸还原法临检中心推荐染料结合法氧化酶法同位素质谱法　　　　决定性方法原子吸收光谱法(一)实验原理：血清中无机磷在酸性溶液中与钼酸铵反应生成在340nm处有吸收峰的磷钼酸铵，其吸光度的变化与无机磷含量成正比。(二)试剂磷试剂硫酸220mmol/L钼酸铵1.0mmol/L表面活性剂适量校准液：磷酸二氢钾1.29mmol/L防腐剂适量(三)测定步骤混匀，以37℃10’在340nm波长处比色。结果无机磷含量=A样本/A校准×C校准空白管校准管标本管磷试剂纯化水校准液标本(ml)1

4、.01.01.00.020.020.02(四)临床意义1.参考值：成人：0.97-1.62mmol/L儿童：1.45-2.10mmol/L2.增高：甲旁减、慢性肾炎晚期、多发性骨髓瘤、骨折愈合期等。3.减低：甲旁亢、肾小管变性病变时等。(五)方法性能精密度:批内变异CV≤5％。线性范围:0-4mmol/L。三、试剂空白测定1.定义：用蒸馏水调零测定仅仅未加样品的试剂管，用以扣除试剂干扰对结果所造成的系统误差。本次实验用钙离子测定的方法进行试剂空白实验。2.操作试剂空白标准管测定管工作液2.0ml2.0ml2.0ml标准液--

5、---0.02ml-----蒸馏水0.02ml----------标本----------0.02ml室温放5分钟，以蒸馏水调零，612nm测定。计算空白值=空白OD/标准OD×标准浓度样本值=×标准浓度样本OD-空白OD标准OD-空白OD3.试剂空白的选择原则（1）试剂中某组分在测定波长下对光有吸收；（2）被测试样本身在测定波长下没有光吸收；（3）被测试样中的其他成分与显色剂作用后在测定波长下没有光吸收；（4）利用改变加入试剂的次序使试样不显色。预习下次课内容：总蛋白测定及回收试验。