第1节　微生物发酵及其应用.ppt

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1、微生物包括哪五类：病毒细菌放线菌真菌原生动物原核生物界原生生物界真菌界病毒界专题2:微生物的培养与应用微生物的基础知识微生物病毒真菌原生动物原核生物结构简单,个体多数十分微小(光学显微镜或电子显微镜才能看到)，繁殖迅速课题1.微生物的实验室培养三.纯化大肠杆菌四.菌种保存一.培养基二.无菌技术课题1.微生物的实验室培养一.培养基1.概念:人们按照对微生物的营养物质的不同需求,配制供微生物生长繁殖的营养基质。课题1.微生物的实验室培养一.培养基2.成分：一般都含有水、碳源、和氮源、无机盐、等营养物质，另外还需要满足微生物生长对

2、pH、特殊营养物质,以及氧气的要求。课题1.微生物的实验室培养一.培养基3.分类：a根据物理性质分固体培养基——用于微生物的分离计数液体培养基——常用于工业生产课题1.微生物的实验室培养一.培养基3.分类：b根据化学成分分合成培养基——成分明确天然培养基——成分不明确c根据用途分选择培养基鉴别培养基选择培养基加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基分离导入了目的基因的受体细胞课题1.微生物

3、的实验室培养二.无菌技术利用较为温和的化学或物理方法,杀死物体中的部份微生物(不包括芽孢和孢子)1.消毒以强烈的化学或物理方法消灭体内外所有微生物,包括芽孢和孢子。2.灭菌芽孢有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.a.煮沸消毒法:100℃煮沸5-6minb.巴氏消毒法:70-75℃下煮30min或80℃下煮15minc.化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行

4、皮肤消毒;氯气消毒水源d.紫外线消毒……常用消毒的方法：干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.灼烧灭菌常用灭菌的方法：课题1.微生物的实验室培养三.纯化大肠杆菌一).培养基配制与灭菌二).接种、培养—纯化大肠杆菌三).结果分析与评价课题1.微生物的实验室培养二.纯化大肠杆菌2)称量(按比例)3)溶化1)计算4)灭菌:将包好培养基和培养皿进行高压蒸汽灭菌5)待冷却到50OC时倒平板一).培养基配制与灭菌倒平板操作的讨论用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时即可开始

5、倒平板。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止凝结在皿盖上的水珠落入培养基,造成污染空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。课题1.微生物的实验室培养二).纯化大肠杆菌1.原理在适宜环境下，单个细菌能迅速生长增殖形成一个细胞群体－－菌落课题1.微生物的实验室培养二).纯化大肠杆菌2.方法:平板划线法、稀释涂布平板法1.原理在适宜环境下，单个细菌能迅速生长增殖形成一个细胞群体－－菌落课题1.微生物的实验室培养4.平板划线法通过接种环在琼

6、脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。注意事项二).纯化大肠杆菌课题1.微生物的实验室培养注意事项:a.在操作的第一步、划线之前以及划线操作结束时都要灼烧接种环？避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者课题1.微生物的实验室培养注意事项:b.在灼烧接种环之后,要等其冷却后再进行划线以免接种环温度太高，杀死菌种。c.在作第二次以及其后的划线操作时

7、，总是从上一次划线的末端开始划线能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。5.稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。二).纯化大肠杆菌系列稀释操作101102103104105106涂布平板操作(1)将涂布器浸在盛有70％的酒精的烧杯中。(2)取少量菌液(不超0.1mL),滴加到培养基表面。(3)将沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷却8～10s。(4)用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。课题1.微生物的实验室培养6.

8、培养观察将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37度恒温箱中培养12h和24h后，分别观察记录二).纯化大肠杆菌1.未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌落生长，说明了什么？无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则，说明培养基有杂菌，需要重新制备。2.在接种大肠杆菌的培养基上，能否